химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

умажную [46, 66], а также тонкослойную хроматографию

[31

Дансильный метод, который разработали Грей и Хартли в 1963 г. [24], во многих отношениях сходен с динитрофторбензольным методом. Основной реагент в дансильном методе — диметиламино-нафтилсульфохлорид. Дансильная группировка присоединяется к тем же группам пептида, что и ДНФБ, но благодаря интенсивной флуоресценции дансильные производные могут быть обнаружены в очень малых количествах (до Ю-4 мкмолей вещества).

Другим методом определения N-концевой аминокислоты служит деградация фенилизотиоцианатом по Эдману [15, 16]. Фенил -изотиоцианат превращает N-концевые аминокислоты в фенилтио-карбамильные производные, отщепляющиеся в виде производных фенилтиогидантоина в условиях, при которых не повреждаются другие пептидные связи. Этот метод позволяет осуществить постепенную деградацию полипептидов и пептидов. Отщепившийся аминокислотный остаток можно идентифицировать хроматографией фенил-тиогидантоиновых производных [76] или сопоставлением аминокислотного состава укороченных пептидов и исходного материала. В последнее время реакцию Эдмана обычно комбинируют с дансиль-ным методом, так как в таком варианте для определения аминокислоты, занявшей концевое положение, требуется очень малое количество деградируемого пептида.

N-концевую последовательность можно также определить с помощью фермента аминополипептидазы, который специфически гидро-лизует N-концевые пептидные связи (т. е. связи, образуемые аминокислотой со свободной a-NH2-rpynnoft) [77, 81]. Освободившиеся после гидролиза аминокислоты идентифицируют хроматографи-чески.

Подобным образом с помощью карбоксипептидаз А и В можно определить С-концевые аминокислоты и С-концевую последовательность. Если в С-концевом положении находится основная аминокислота, то ее можно отщепить лишь карбоксипептидазой В [21].

Вслед за первыми работами Сэнгера в последние годы удалось расшифровать первичную структуру многих полипептидов и белков. После определения аминокислотной последовательности инсулина были расшифрованы последовательности рибонуклеазы, полипептида из вируса табачной мозаики, нескольких препаратов цитохро-ма с, различных цепей гемоглобина, ингибитора трипсина, химо-трипсиногена и химотрипсина, трипсина, глицеральдегидфосфат-дегидрогеназы и т. д. Вместе с последовательностями некоторых пептидных гормонов эти данные вошли в «Атлас структуры и аминокислотной последовательности белков», который впервые был опубликован в 1966 г. и затем неоднократно переиздавался1.

Второе издание этого атласа, опубликованное в 1967—1968 гг., вдвое больше первого и представляет собой исключительно ценную сводку результатов работ по расшифровке последовательности. Там приведены последовательности цитрохрома с, ферредоксина, цепей гемоглобина, миоглобина, различных иммуноглобулинов и их L-цепей, трипсиногена, трипсина, химотрипсиногена, химотрипсина, субтилизина, а-лакталь5умина, триптофан-синтазы, лизоци-мов, рибонуклеазы, ингибитора трипсина, пептидных гормонов, ядов, токсинов, вирусных белков ит. д. Включая видовые вариации, число белков с расшифрованной структурой достигает почти двухсот.

Для решения определенных биологических проблем вовсе не обязательна расшифровка всей последовательности изучаемого белка. Например, при выяснении связи между структурой и функцией или при анализе видовой специфичности, а также при решении ряда других проблем требуется выяснить последовательность определенной части структуры того «ответственного» (marked) пептида, который непосредственно участвует в рассматриваемом процессе. В зависимости от изучаемой функции понятие «ответственный» пептид может быть достаточно широким. Это либо активный центр, либо участок связывания, либо, наконец, локус специфичности.

1 Одно из последних изданий опубликовано в 1972 г. (том 5) под редакцией Дейхоф; приложение к нему вышло в свет в 1973 г. (см. список литературы). — Прим. ред.

Выяснить локализацию «ответственного» пептида далеко не просто. Природа редко наделяет интересную с точки зрения экспериментатора структуру какой-либо меткой. Однако такая метка имеется, например, у гем-связывающего пептида цитохрома с. Часть пептида, непосредственно участвующая в осуществлении биологической функции, ковалентно соединена тиоэфирной связью с прос-тетической группой цитохрома. Эта стабильная связь облегчает выделение и анализ этого пептида. Туппи и сотр. [87—91] удалось сравнить последовательности гем-связывающих пептидов, выделенных из цитохромов с разного видового происхождения. Некоторые из этих данных приведены в табл. 6

Таблица 6

Гем-связывающие пептиды из цитохромов с разного видового

происхождения

Вид

Аминокислотная последовательность

Бык Лошадь Свинья Лосось \ Курица / Дрожжи Rhodospi-rillum ru brum

ВалТлн-Лиз-Цис-Ала-Глн-Д«с-Г«с-Т/?е-Вал-Глу-Лиз

. Вал-Глн-Лиз-Цис-Сер-Глн-Дас-Гмс-Тре-Вал-Глу-Лиз .Лиз-Тре-Арг-Цис-Глу-Лей-Ццс-Гнс-Гре-Вал-Глу . .

Цис-Лей-Ала-#«с-Г «с-Гре-Фен-Асп-Глу-Гли

Как видно из данных табл. 6, цитохромы да

страница 17
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
как выпрямить крыло без покраски на форд фокус 2
http://taxiru.ru/shashki-dlya-taxi-all/
концерт scorpions в спб 2017 сэт лист
danfoss fc-051 на 3,7квт

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(18.10.2017)