химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

бразуемые основными аминокислотами, т. е. связи, в которых участвуют остатки лизина и аргинина. Пептидные связи Лиз-Про и Арг-Про устойчивы к гидролизу. Частичной устойчивостью к трипсиновому гидролизу обладают также некоторые другие пептидные связи, например в структуре ... Лиз-Лиз-X... связь Лиз-Лиз или связи в пептидах Арг-Арг, Ар г-Лиз и Лиз-Ар г. «Скопление» основных аминокислот в определенных участках пептида обусловливает частичную устойчивость его к гидролизу. То же самое справедливо и для пептидных связей Лиз-Глу и Арг-Глу.

Примесь химотрипсина в препарате трипсина может в значительной степени исказить специфичность трипсинового гидролиза, поэтому крайне важно избегать загрязнения трипсина химо-трипсином. Загрязненный препарат трипсина можно очистить хроматографией [84]; химотрипсин, содержащийся в препарате, можно инактивировать кислотой или недавно полученными синтетическими ингибиторами.

Благодаря специфичности триптического гидролиза им можно «управлять», внося те или иные изменения в структру гидролизу-^мых соединений. Например, по мере аминоэтилирования свободных SH-групп увеличивается число NH2-rpynn и, следовательно, 2* увеличивается количество пептидных связей, чувствительных к трипсину, т. е. в гидролизате оказывается больше триптических пептидов [48, 63]. Если же, наоборот, обратимо или необратимо заблокировать NH2-rpynnbi лизина, то трипсин сможет гидроли-зовать только те пептидные связи, в которых участвует аргинин. В этом случае в гидролизате обнаруживаются крупные аргинило-вые пептиды. При обратимом блокировании остатков лизина, например путем трифторацетилирования, после выделения аргини-ловых пептидов их можно деблокировать, а затем подвергнуть триптическому гидролизу; при этом будут расщепляться только пептидные связи лизина.

Новейшим методом обратимого блокирования e-NH2-rpynn можно считать реакции малеинирования [47] ицитраконилирования [13]. Оба реагента, участвующие в этих реакциях, не только блокируют аминогруппы, но и увеличивают растворимость крупных фрагментов, полученных при триптическом гидролизе. Благодаря обратимости обеих реакций ацилирующие реагенты подобного типа могут с успехом применяться для расшифровки первичной последовательности.

Изложенный выше метод «управляемого протеолиза» играет существенную роль в анализе аминокислотной последовательности высокомолекулярных белков.

Химотрипсин расщепляет больше пептидных связей, чем трипсин. При кратковременном гидролизе в течение 2—3 ч фермент расщепляет пептидные связи, в которых участвуют остатки тирозина, фенилаланина и лейцина. И в этом случае полную устойчивость к гидролизу сохраняют пептиды пролина. «Скопления» ароматических аминокислот, например структуры, подобные ... Фен-Фен ... или... ... Тир-Фен... ит. д., обладают частичной устойчивостью к гидролизу. Однако с увеличением продолжительности гидролиза происходит разрушение пептидных связей многих типов. Подробный обзор по химотрипсину был сделан Деснуэллем [7]; сведения о специфичности химотриптического гидролиза можно найти в обзоре Хилла [34].

Специфическое химическое расщепление пептидных связей можно осуществить с помощью двух окисляющих агентов. Один из них, N-бромсукцинимид, вызывает расщепление пептидной связи, в которой участвует остаток триптофана, с одновременным разрушением этого остатка и его окислением [64]. Успешное использование этого метода удалось лишь в нескольких случаях. Помимо изучения структуры полипептида, выделенного из вируса табачной мозаики, N-бромсукцинимид был использован при анализе последовательности низкомолекулярного глюкагона [58] и N-KOH-цевой последовательности гемоглобина [79]. Существенный недостаток этого метода заключается в том,что N-бромсукцинимид расщепляет не все пептидные связи, образуемые остатками триптофана.

В реакциях с одним и тем же препаратом белка могут быть окислены от 2 до 80% этих связей. Более того, некоторые белки, например цитохром с, оказываются полностью устойчивыми к действию N-бромсукцинимида.

Другой окислитель, бромциан, — более надежный реагент [261. Он разрушает пептидные связи, в которых участвует остаток метио-нина. Механизм этой реакции подобен расщеплению иодацетами-дом [45]. Окисление бромцианом широко применяют как специфичный метод для получения крупных пептидных фрагментов. Весьма успешно он был использован наряду с другими методами при расшифровке аминокислотной последовательности рибонуклеазы [27], миоглобина [17], трипсиногена[36] и альдолазы [42, 68,69].

Даже при специфическом ферментативном или химическом расщеплении белка или полипептида среднего молекулярного веса получается довольно сложная смесь пептидов. Существует набор разнообразных методических приемов фракционирования этой смеси и очистки отдельных компонентов. Вряд ли можно предложить какую-то одну схему фракционирования, которая была бы равным образом применима ко всем белковым гидролизатам. Первым этапом обычно является предварительное фракционирование в соответствии с зарядом или размером пептидов. За н

страница 15
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
купить свадебный букет невесты недорого гольяново
Компания Ренессанс: купить лестничные марши - цена ниже, качество выше!
кресло ch 626
Вся техника в KNSneva.ru Thomson T32D16DH-01B - в розницу по опту в КНС СПБ !

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(10.12.2016)