химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

ификации и трифторацетилирования.

До сих пор не удалось обнаружить дипептиды, содержащие Цис и Цис2. Цис особенно склонен к ^-элиминированию, на что уже указывалось в разделе об аминокислотах. Из-за отсутствия подходящих S-защитных групп были вынуждены прибегнуть к десульфи-рованию на никеле Ренея [121]. Согласно этому методу, эфиры защищенных пептидов десульфируются на никеле Ренея в процессе продолжительного нагревания в 90%-ном водном метаноле. В результате из цистеиновых и цистиновых соединений образуются соответствующие аланиновые пептиды, которые можно отличить от алани-новых пептидов, имеющихся в исходной молекуле, с помощью D20. Аналогично методике Бимана, SH-группа замещается на дейтерий, что обеспечивает идентификацию компонентов в масс-спектрометре. Одновременно с Цис десульфируются метиониновые соединения — они превращаются в пептиды а-аминомасляной кислоты, которые легко детектируются в газовом хроматографе.

Соединения с Apr, Гис и Три до сих пор исследованы очень мало. Сложные дипептиды, содержащие эти аминокислоты, вряд ли можно детектировать. Для Apr существует возможность его превращения в Ори с помощью аргиназы г30]. Это может оказаться полезным, так как после триптического гидролиза больших пептидов благодаря его специфичности часть остатков Apr будет находиться в С-концевом положении фрагментов. При обработке этих пептидов аргиназой соответствующие С-концевые аминокислотные остатки превращаются в Орн, что делает пептиды доступными для ГХ. После частичного кислотного гидролиза пептиды, содержащие Три, практически не образуются, поскольку во время этой процедуры происходит разрушение Три.

Последовательность стадий вышеописанного анализа можно схематически суммировать следующим образом; 1) частичный гидролиз, 2) этерификация, 3) трифторацетилирование -+ ГХ-анализ, 4) десу-льфирование -»- ГХ-анализ, 5) триметилсилилирование -»? ГХ-анализ.

Из сравнения результатов трех ГХ-анализов можно очень точно определить положение пептидов, содержащих оксиаминокислоты, Цис и Цис2. После десульфирования одни пики исчезают, а другие появляются — они. принадлежат серусодержащим пептидам. Если в исходном образце Мет отсутствует, то это должны быть цистеино-вые (цистиновые) пептиды, которые таким образом легко идентифицируются. Та же ситуация наблюдается при количественном три-метилсилилировании; при этом выявляются соединения, содержащие Сер, Тре, Опр и Тир. Производные дипептидов, содержащих Опр и Тир, элюируются при относительно высоких температурах. Таким образом, к определенным выводам можно придти даже на основании интервала удерживаемых объемов.

В заключение можно сказать, что с помощью ГХ можно идентифицировать в виде дипептидов большинство природных аминокислот. Возможность детектирования многих аминокислот даже в виде трипептидов, а в исключительных случаях и тетрапептидов, дает в руки исследователя быстрый и относительно несложный метод определения последовательности олигопептидов средней длины. ГХ применяется сейчас в основном как быстрый и эффективный метод разделения. Более полное использование достоинств ГХ достигается при комбинировании с масс-спектрометрией [68, 106]; оно уже было с успехом применено для анализа смесей жирных кислот [75]. Весьма обещающим является использование специально сконструированных ионных источников, в результате чего становится излишним присоединение к газовому хроматографу детектора [13].

Фиг. 75—80 иллюстрируют характер ГХ N-ТФА-метиловых эфиров пептидов различной длины, которые были подвергнуты частичному кислотному гидролизу или метанолизу.

Как показано на фиг. 75 и 76, если анализируют тетрапептид, можно обнаружить все возможные фрагменты. В одном случае удается даже идентифицировать исходный пептид. На фиг. 77 представлена хроматограмма частичного гидролизата окситоцина, который в соответствии с вышеприведенной схемой десульфировали и триметилсилилировали. Были идентифицированы все возможные дипептиды, в том числе и соединения, содержащие Асп, которые образовывались при расщеплении лишь в небольшом количестве. Сравнивая различные газовые хроматограммы, можно сделать заключение о присутствии последовательностей, содержащих Цис (или Цис2) и оксиаминокислоты. На фиг. 78, 79 и 80 представлены газовые хроматограммы частичного гидролизата А-цепи инсулина, полученные на разных стадиях рассмотренных ранее превращений. После десульфирования, как видно из сравнения фиг. 78 и 79, появляются новые сигналы 2, 3 и 5, тогда как пики 7 и 12 становятся более широкими. Во всех этих случаях образуются соединения с Ала. Аналогичным образом после триметилсилилирования находят на фиг. 80 новые пики 2, 3, 4, .8 и 10, а сигналы 2,4> 5 и 8, имеющиеся на фиг. 78, — исчезают. Эти пики соответствуют пептидам А-цепи, содержащим Сер и Тре, причем последние элюируются при относительно высоких температурах удерживания. После силилиро-вания пики выходят при более высоких температурах эдюирования. Как .и в случае других пептидов, после кислотной деградации можно было обнаружить в

страница 141
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
rockwheel gt14 купить
участок у воды новая рига 50 км от мкад
http://www.prokatmedia.ru/sound.html
сетка кладочная купить екатеринбург

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(27.06.2017)