химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

ссе многостадийного изотермического исследования, а компоненты смеси при этом можно надежно идентифицировать с помощью подходящего контроля.

При использовании режима с программированием температуры подобные смеси легко разделяются в одном аналитическомj I 1 ] ^

150 200 250 300

L_I I I I I (_>.

О 10 20 SO 40 50 Минуты

Фиг. 78. Газовая хроматограмма частичного кислотного гидролизата А-цепи иисулииа после этерификации и трифторацетилироваиия.

Колонка длиной 1,8 м с 10% SE 30 иа даатопорте Р; скорость потока Не 66 мл/мии. Сначала режим изотермический (150°С); после выхода Сю — метилового эфира каприно-БОЙ кислоты — линейное программирование температуры с градиентом 5 град/мни, / <— Глу; 2 —Сер-Вал; 3 —Иле-Вал; 4 — Сер-Лей; 5 —Тир; ff —Вал-Глу; 7 —Глу-Лей; в — Лей-Глу; 9 —«Лей-Тир; 10 — Глу-Глу; С]В — метиловый эфир стеариновой кислоты

(стандарт).

опыте, как видно из хроматограмм, представленных на фиг. 75—80. Отдельные группы соединений — аминокислоты, ди-, три- и тетра-пептиды — выходят в различных температурных интервалах, что позволяет, несмотря на некоторое перекрывание (напримерг аминокислоты с большим молекулярным весом начинают выходить вместе с дипептидами), обнаруживать по виду чхфоматограмм качественные различия, характерные для разных последовательностей, подобно методу «отпечатков пальцев» [39]. Чтобы применять ГХ для определения последовательности, необходимо знать, какие комбинации

ты. 24-часовая инкубация в ОД н. метанольном растворе НС1 при комнатной температуре удовлетворяет необходимым условиям [15].

Трифторацетилирование избытком метилового эфира трифгор-уксусной кислоты в абсолютном метаноле при комнатной температуре с добавлением триэтиламина приводило к различным выходам при превращениях аминокислот [109]. Риск образования дикетопиперазинов; характерного для эфиров дипептидов, можно уменьшить при добавлении большого избытка ацилирующего агента [119]. Дикетопиперазины тоже можно подвергать газовой хроматографии, но они дают сильно асимметричные пики и поэтому непригодны для анализа последовательности [121]. Трифторацетилирование хлор гидратов пептидов можно проводить также в реакции с трифтор уксусным ангидридом [119]. Хотя при этом существует опасность дополнительного расщепления пептидных связей, соответствующие продукты образуются с таким низким выходом, что это не может повлиять на последующий анализ [111]. При комнатной температуре ацилирование ангидридом протекает быстрее и более полно. Как и в методе Бимана, эфиры N-ТФА-пептидов хорошо отделяются от непрореагировавшей части молекул экстракцией кислотой и водой. При такой процедуре гидролизуются О-ТФА-про-изводные, образовавшиеся в ходе реакции с ангидридом. Полученную смесь защищенных пептидов вносят в подходящий растворитель, например тетрагидрофуран, этилацетат или метанол, и подвергают фракционированию.

ГХ ди-, три-, и, возможно, многих тетрапептидов, состоящих из аминокислот Ала, Вал, Лей, Иле и Про, не вызывает никаких затруднений. Поскольку у Гли нет боковой цепи, пики соответствующих дипептидов часто имеют «хвосты». Это явление, вероятно, вызвано эффектами адсорбции; ими же, по-видимому, объясняется неполное элюирование N-ТФА-Гли-Гли-Гли-ОСН 3 [19]. С Мет были исследованы только дипептиды, ас Фен — также и трипептиды. Хотя, как следует из поведения N-ТФА-Ала-Фен-Фен-ОСНз, трипептиды, состоящие из аминокислот с высоким молекулярным весом, элюируются не всегда, при использовании коротких колонок с малым количеством жидкой фазы можно получить удовлетворительные результаты.

Что касается полифункциональных аминокислот, то дипептиды, содержащие Глу, Лиз и Орн, не представляют трудностей ни для получения производных, ни для хроматографии. Дополнительные функциональные группы защищают в ходе обычного получения производных. Однако у дипептидов, содержащих Лиз и Орн, в результате адсорбции наблюдается сильное размывание пиков на колонках, содержащих менее 5% жидкой фазы [122]. Изомерные а- и р-пептиды, содержащие Глу, при ГХ разделяются [114, 121]. В аналогичных исследованиях метиловых эфиров N-ТФА-производ-ных пептидов, содержащих Асп, при нагревании обнаружено образование циклических имидов, зависящее от температуры системы и более заметное для р-пептида [106]. Отделить имиды от соответствующих а-пептидов можно только на капиллярных колонках. Возможно, при прямом внесении образца в колонку подобных реакций удалось бы избежать. Трипептиды, в которые входят указанные выше аминокислоты, до сих пор не исследованы.

Сер и Тре из-за термического р -элиминирования во время внесения образца при высокой температуре могут давать несколько сигналов. Наилучшим методом защиты этих аминокислот оказалось триметилсилилирование гексаметилдисилазаном [121]. Тирозинсо-держащие дипептиды в результате О-триметилсилилирования дают острые симметричные пики. Эти соединения могут быть приготовлены при нагревании в течение 30 мин в избытке гексаметилдисила-зана после этер

страница 140
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
ремонт вмятин после града
топпер минск
стоимость решетка вр-к 600х150 сезон
контактные линзы vizoteque

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(17.10.2017)