химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

ределении последовательности является специфический гидролиз.

Значительное затруднение при расшифровке последовательности аминокислот может возникнуть, если в молекуле анализируемого белка присутствуют остатки цистеина или цистина. При окислении цистеина ооразуются S—S-мостики, которые не только являются причиной ошибочных выводов, но и препятствуют дальнейшему анализу, так как содержащие их белки и полипептиды весьма устойчивы к ферментативному расщеплению. Поэтому до проведения анализа рекомендуется избавляться от S—S-мостиков и предотвращать спонтанное окисление свободных SH-групп. Кроме того, следует иметь в виду возможность SH/S—S-обмена. Если в реакционной смеси одновременно присутствуют свободные SH-группы и S—S-мостики, в ней могут происходить перестройки, при которых связанные S—S-мостиком пары пептидов обмениваются своими партнерами:

Rx—S-S-R2 + R3-S-S—R4 Ri-S—S-R3 + R2—S-S-R4.

SH- и S — S-группы элиминируют с помощью количественной и необратимой реакции окисления белков надмуравьиной кислотой. В результате этой реакции цистеин или цистин превращается в цис-теиновую кислоту [86].

нсэон

R—SH > R—S03H.

При окислении надмуравьиной кислотой триптофан разрушается, а значительная часть тирозина при последующем гидролизе НС1 превращается в хлорированный тирозин [85]. При низкой температуре окисление проходит более мягко, причем в этих условиях

2—439

количественный характер образования цистеиновой кислоты сохраняется [35].

Разрыв S — S-связей можно вызвать также с помощью реакции восстановления. Если в качестве восстановителей используются тиосоединения, то в ходе реакции возникают свободные реакцион-носпособные SH-группы, которые могут стать помехой дальнейшему анализу. Поэтому после реакции восстановления их необходимо блокировать. Лучшим способом блокирования является карбокси-метилирование. Схема реакции такова:

Rr-S-S—R2 Rt—SH + R2-SH, 2BrCH2COOH

Ri—SH + R2—SH > Ri—S—CHa—COOH +R2—S—CHa~COOH.

В результате образуется производное карбоксиметилцистеина. Если в этой реакции использовать 14С- Вг- или 14С-1- ацетат, то, помимо разрыва S —S-связей и блокирования возникающих SH-rpynn, можно радиоактивно пометить пептиды, содержащие цистеиновые остатки.

Одним из вариантов восстановления является реакция сульфи-толиза. В присутствии Си2+ при щелочном рН соединения, имеющие S—S-связи (или свободные SH-группы), под влиянием солей сернистой кислоты превращаются в S-сульфонаты. Реакция происходит следующим образом:

R—S—S—R + 2СиЗ+ + 2SOf~ zЈ 2R—S—SO" + 2Cu+, R—SH + 2Cu2+ + SOf- R—S—SCvf + 2Cu+ + H+.

В структурном анализе белков реакция сульфитолиза никогда широко не использовалась, и в настоящее время ее почти не применяют [5, 11, 14, 33, 59].

Одна из основных стадий расшифровки аминокислотной последовательности состоит в частичном расщеплении молекул исследуемого белка. Используемые для этой цели методы частичного гидролиза или специфического химического расщепления, кроме максимально возможной специфичности, должны отвечать следующим требованиям: 1) в ходе реакции аминокислоты не должны разрушаться; 2) специфичность реакции, т. е. расщепление в строго определенном месте, должна быть заранее известна; 3)в ходе расщепления не должно возникать побочных реакций, таких, как перенос ацильной группы, транспептидирование или образование случайных пептидов.

Методы частичного гидролиза используются широко, но почти все они лишены специфичности и поэтому пригодны только для получения мелких фрагментов, например на конечных этапах расщепления больших пептидов. Самым старым из методов неспецифическога частичного гидролиза является частичный кислотный гидролиз.

Сэнгер и Туппи [72] применили этот метод при расшифровке структуры В-цепи инсулина. Выделив и проанализировав не менее 60 пептидов, им удалось расшифровать только четыре участка цепи, включающих всего 19 остатков аминокислот. В частичных кислотных гидролизатах, помимо пептидов, встречается до 25% свободных аминокислот [54]. В ходе кислотного гидролиза полностью разрушается триптофан [53] ив значительной степени повреждаются оксиаминокислоты [65].

Из методов неспецифического ферментативного расщепления чаще всего применяется гидролиз пепсином, папаином, бактериальными или грибковыми протеазами. Все три типа ферментов дают гидролизаты, представляющие собой сложную смесь мелких пептидов. В связи с этим их лучше использовать на конечных этапах расщепления крупных пептидов, полученных методами специфического гидролиза. Общий обзор методов ферментативного гидролиза сделал Хилл [34]; подробные сводки о действии пепсина, папаина и бактериальных протеаз опубликовали Бовей и Янари [2], Смит и Киммель [78] и Хагихара [28] соответственно.

Специфический ферментативный гидролиз можно провести в присутствии трипсина и химотрипсина. Эти ферменты по современным представлениям обладают наибольшей специфичностью расщепления, а их препараты, имеющиеся в продаже, отличаются высокой чистотой.

Трипсин гидролизует пептидные связи, о

страница 14
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
курсы 1 с 8.2 зарплата
дачный участок цыан
дизайнерским курс
курсы пиара в москве

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(04.12.2016)