химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

ще более усложняют картину. Известно, что при восстановлении третичного амида с помощью LiAIH4 происходит расщепление амидной связи и образуются альдегиды и амины [104]. Подобные реакции расщепления уже наблюдали для пролиновых пептидов [74]. Они встречаются также в ходе восстановления пептидов другими гидридами металлов [63]. Мы вынуждены признать, что этот метод может применяться только для не слишком сложных смесей нескольких простых аминокислот. Но даже при таком ограничении его важным преимуществом является то, что для анализа требуется очень небольшое количество вещества (несколько миллиграммов).

МЕТОД ВЕЙ ГАНДА И ДР. [68, 113-115, 120, 121, 123]

В данном методе в отличие от рассмотренных выше пептиды сначала защищают и затем, за некоторыми исключениями, непосредственно подвергают ГХ. Аминогруппы защищают остатком ТФА, а карбоксильную группу блокируют в процессе этерификации метанолом. На летучесть ТФА-соединений уже неоднократно указывалось; с помощью возгонки в высоком вакууме было достигнуто разделение соответствующих производных аминокислот, ди-, три- и более крупных пептидов [107].

Для ГХ этих соединений нужно было прежде всего решить проблемы, связанные с термостабильностью колонок и подобрать метод разделения. Из-за более высокой, чем у аминокислот, полярности для пептидов требуется, как правило, температура более 200° С. Не касаясь вопроса о стабильности фаз, отметим, что применение в данном случае полярных жидких фаз, например реоплекса или полифенилового эфира, довольно ограничено. Для сравнительно простых дипептидов их использование дало хорошие результаты, но если учесть, что при этом число разделяемых соединений было мало, вряд ли можно надеяться на более широкое применение этой методики в аналитических работах по установлению последовательности аминокислот. Удовлетворительными разделяющими фазами оказались неполярные силиконовые каучуки SE 30 и SE 52; менее выгоден апиезон L.

При использовании подобного метода разделения для анализа последовательности аминокислот избирательность разделяющих

мВ

Растворитель

4l

и

_|_

150 200 250 J00 Г,0 С

О 10 20 J0 40 50 Минуты

Фиг. 75. Газовая хроматограмма частичного гидролизата Лей-Лей-Вал-Вал после этерификации и трифторацетилирования.

Колонка длиной 1,8 м с 20% SE 30 на диатопорте W скорость потока Не 62 мл/мин. Сначала режим изометрический (150вС); после выхода Сю — метилового эфира каприновой

кислоты — линейное программирование температуры с градиентом 5 град/мин. 1 — Вал; 2 — Лей; 3—Вал-Вал; 4 — Лей-Вал; 5 —Лей-Лей; 6 — Лей-Вал-Вал; 7 — Лей-Лей-Вал;

8 — Лей-Лей-Вал-Вал.

фаз не играет большой роли, если анализируют не очень большое число соединений; решающим в данном случае будет число компонентов, детектируемых на одной колонке. Так как тетрапептиды можно обнаружить в газовом хроматографе только в исключительных случаях, наибольшее внимание неизбежно сосредоточивается на наиболее полной идентификации ди- и трипептидов. В соответствующих работах показано, что ее можно осуществить только с вышеупомянутыми фазами.

мВ

Растворитель

II

150 200 250

Г I L

300

О 10 20 30 40 Минуты

50

Фиг. 76. Газовая хроматограмма частичного кислотного гидролизата Лей-Фен-Вал-Вал после этерификации и трифторацетилирования.

Колонка длиной 1,8 м с 20% SE 30 на диатопорте W; скорость потока Не 62 мл/мин. Сначала режим изотермический (150°С); после выхода Сю — метилового эфира каприновой кислоты — линейное программирование температуры с градиентом 5 град/мин. 1 — Вал; 2 —Лей; 3 —Фен; 4 — Вал-Вал; 5 —Фен-Вал; 6 — Лей-Фен; 7 — Фен-Вал-Вал; S — Лей-Фен-Вал.

Как уже отмечалось, поскольку в смеси находится большое число различных соединений, не приходится рассчитывать на полное разделение компонентов, тем более, что разделяющие фазы обладают относительно слабой избирательностью. В связи с этим целесообразно анализировать не слишком длинные пептиды после проведения их частичного гидролиза. Например, при расщеплении декапептида в наиболее благоприятных условиях получается 9 дипептидов, 8 три-пептидов и т. д. Если данный пептид состоит из 10 различных аминокислот, которые все детектируются при ГХ, тогда необходимо разделить смесь, состоящую из 27 соединений, не считая тетрапепти-дов, которые, вероятно, тоже могут быть обнаружены. Все возможные короткие фрагменты, разумеется, идентифицировать довольно трудно. Указанная область размеров длины цепи (от аминокислоты до тетрапептида) является, несомненно, предельной для возможностей этого метода.

Неудовлетворительное разделение, однако, пытаются компенсировать с помощью масс-спектрометрии. Было показано, что на масс-спектрометре полностью идентифицируются смеси простых пептидов [123], причем наложение пиков ни в коей мере не исключает идентификации пептидных производных.

проводить в одном аналитическом опыте, тогда при нанесении одинаковых количеств вещества гораздо проще проводить повторный анализ всей смеси в проце

страница 139
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(20.02.2017)