химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

образцом после выхода с колонки так, что только часть смеси анализируется в высокочувствительном детекторе. Технически эти требования вполне выполнимы.

Малые количества вещества, которые могут быть получены в результате аналитической ГХ, идентифицировать очень трудно. Вместе с тем использование больших количеств вещества при внесении проб не только лишило бы метод одного из главнейших его достоинств, но могло бы неблагоприятно повлиять на разделяющую способность колонки, поэтому в свете рассмотренных выше проблем разделения этого следует всячески избегать. Следовательно, обычные методы деградации, применяемые для анализа последовательности аминокислот, в данном случае не пригодны.

Как показано многочисленными исследованиями, убедительную идентификацию производных пептидов можно провести с помощью масс-спектрометрии [34, 85, 123]. Комбинация этих двух методов может значительно облегчить анализ последовательности пептидов — к тому же для обоих, методов требуются очень малые количества вещества. Газовая хроматография пептидов изучалась только в двух лабораториях, в которых были предложены различные методики получения их производных. Для последующей идентификации крайне важно, чтобы структуру исходных соединений можно было узнавать по их производным. Хотя детальное рассмотрение масс-спектрометрии выходит за рамки рассматриваемого ниже процесса ГХ пептидов, многие операции, которые будут описаны, должны рассматриваться с учетом возможного использования масс-спектрометрического метода. Соединение капиллярной или набивной колонки непосредственно с масс-спектрометром дает возможность измерять полный масс-спектр каждого пика и, таким образом, с помощью этого способа получать необходимую информацию.

Наряду с простым отбором фракций в капилляры на выходе газового хроматографа и переносом их в масс-спектрометр существуют различные способы соединения этих двух приборов [13, 20, 33, 75,4 97].

МЕТОД БИМАНА И ДР. 16, 7]

На основании работ Янгса [129] по ГХ эфиров N-ацетиламино-кислот следовало ожидать, что разделение соответствующих производных пептидов возможно лишь в исключительных случаях. Исследования в этом направлении были проведены Эвансом [25]. Биман и др. [6] изучали полиаминоспирты, образующиеся из эфиров N-ацетилпептидов при восстановлении LiAlH4; их получение ранее было описано Каррером и Николаусом [50]:

R R' R"

СН3СО—NH—CH—СО—NH—CH—СО—NH—CH—COOR'"

| 1ЛА1Н4

R R' R"

СН3СН2—NH—CH—СН2—NH—CH—СН2—NH—СН—СН2ОН

Эти соединения настолько летучи, что даже три- и тетрапептиды можно подвергать ГХ. Летучесть существенно снижается, если в исходной молекуле присутствуют оксигруппы или они образуются при восстановлении. Поскольку из-за больших удерживаемых объемов и образования «хвостов» разделение оказалось неудовлетворительным, было предложено [7] элиминировать оксигруппы путем замещения их на хлор и последующего восстановления:

СН3 СН3 СН2ОН

\ / I

СН сн2

I I •

СН2 СНз СН2

СНзСН2—NH—СН—СН2—NH —СН—СН2—NH—СН—СНаОН

jsoci,

СН3 СН3 СН2С1

\ / I

СН СН2

СН2 СН3 СН2

СН3СН2—NH—СН—СН2—NH— СН— СН2—NH—СН—Cr^Cl

| LJAIH4

СН3 СН3 СН3

12

снй СН2

\ / I

СН,

СН СН,

I I

СН8СН2—NH—СН—СН2—NH—СН—СН2—NH—СН—СНз

Получающиеся в результате этих реакций полиамины имели при разделении в газовом хроматографе заметно меньшие удерживаемые объемы и давали более острые пики. С помощью масс-спектро-метрии все изучаемые пептиды можно было идентифицировать в виде как полиаминоспиртов, так и полиаминов. Определенные аминокислоты в ходе двукратного восстановления теряют некоторые структурные особенности, а образующиеся из них продукты дают при масс-спектрометрии пики с одинаковым числом единиц массы и, следовательно, становятся неразличимыми. К ним относятся Ала и Сер, Вал и Глу, Про и Опр, а также а-аминомасляная кислота, Тре и Асп. В таких случаях их можно различить на масс-спектре, если восстановление вести в присутствии LiAlD4> когда восстанавливаемые группы метятся одним или несколькими атомами дейтерия [7]. Проиллюстрируем это на примере трех последних аминокислот: при двукратном восстановлении боковая цепь а -аминомасля-ной кислоты (/) остается неизменной, в Тре (//) включается один атом дейтерия и в Асп (///) — три:

СН3

з

СН

з

CD.

СН2

CHD

СН,

—NH—СН

—NH— СН— (II)

NH—СН— (III)

Благодаря отличиям в массах соответствующих фрагментов можно различить все три аминокислоты. К сожалению, этот довольно изящный метод имеет недостатки, из-за чего область его применения ограничена. Наиболее серьезный недостаток состоит в том, что побочные продукты, которые могут образоваться при неполном восстановлении, невозможно выделить. Когда имеют дело со смесью пептидов неизвестного состава, трудно отличить истинное производное от побочного продукта, так как последний также может детектироваться в газовом хроматографе. Еще одна побочная реакция в результате разрывов пептидных связей при восстановлении может привести к появлению новых соединений (свободных аминов и альдегидов), которые е

страница 138
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
где купить в москве сетку с полимерным покрытием
AV стенд Bello PVS-4252
Газовые котлы Chaffoteaux Pigma EVO 25 FF
стеллажи под архив

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(05.12.2016)