химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

ю, подобных операций лучше избегать.

Естественно, большое влияние на результаты анализа оказывает способ хранения и внесения образца. В связи с тем, что некоторые аминокислоты чувствительны к гидролизу, необходимы особые предосторожности [19, 53]. Однако прежде всего для анализа смесей аминокислот требуются унифицированные экспериментальные условия превращения аминокислот. Судя по бросающимся в глаза противоречиям в опубликованных данных, эта проблема еще не решена.

Воспроизводимость пиков на газовой хроматограмме определяется поведением компонентов на колонке. Несомненно, что именно здесь кроется одна из самых серьезных проблем количественной ГХ. Как известно, частичное разложение и явления адсорбции (образование «хвостов») в определенной степени мешали анализу многих полифункциональных органических соединений [36]. Об аналогичных наблюдениях, касающихся производных аминокислот, мы уже упоминали [19, 53, 78]; измерения Крукшенка и ШиэнаПб] также не дали удовлетворительных результатов. Для всех 20 проанализированных аминокислот, за исключением Гис и Цис, разброс по величине пиков составлял менее 10%. Однако лишь для 10 аминокислот эти величины были менее 5%. При аналогичных измерениях Ламкин и Герке [53] тюлучили значительно лучшие результаты, но они исследовали меньшее число аминокислот и провели меньше экспериментов. Следует отметить несомненное преимущество прямого внесения образца на колонку, использованного этими авторами. Впоследствии Шталлинг и др. [83] описали количественный ГХ-анализ всех природных аминокислот.

Наконец, следует подчеркнуть, что как для количественного превращения и разделения аминокислот, так и для хорошей воспроизводимости сигналов с достаточной точностью необходима в первую очередь соответствующая калибровка. При этом площади пиков можно было бы непосредственно и надежно сопоставлять с количеством микромолей аминокислот. О ценности методики можно судить только после ее применения для анализа подходящего пептидного гидролизата и сравнения с результатами, полученными другими методами.

ГАЗОВАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ ПЕПТИДОВ

Разделение и идентификация смеси коротких пептидов, которые могут получаться при частичном кислотном или щелочном гидролизе, а также при неспецифическом ферментативном расщеплении полипептидов и подобных больших молекул, все еще представляют собой довольно трудные задачи, требующие для своего решения сложного оборудования и больших затрат времени. ГХ таких смесей может значительно упростить процедуру, хотя проблема идентификации остается нерешенной. В сущности преимущество ГХ состоит в том, что разделенные соединения можно регистрировать при низких концентрациях, выделять свободными от различных

примесей (буферы и др.), а затем подвергать дальнейшим исследованиям.

При разделении пептидов с помощью ГХ возникает ряд проблем, связанных с обилием возможных соединений. Даже разделение природных аминокислот, число которых невелико — довольно трудная задача. Комбинация 18 аминокислот в дипептиды дает 182=324 различных соединения; комбинация в трипептиды приводит уже к 5832 (183) разным компонентам. С ростом длины цепи экспоненциально возрастает число соединений.

Полярность этих веществ также возрастает при удлинении цепи. Соответственно температура при ГХ пептидов должна быть выше, и это сильно ограничивает выбор жидких фаз. Даже если предположить, что с ростом длины цепи число выявляемых компонентов существенно уменьшается, оно все же остается настолько большим, что даже эффективности ГХ и родственных ей методов оказывается недостаточно: исследователю приходится мириться с неудовлетворительным разделением и наложением пиков пептидов. Подобные явления будут более заметны для сходных по структуре веществ и соединений, имеющих большое число возможных изомеров. Это означает, что как раз для наиболее длинных фрагментов, которые, естественно, дают большую информацию об исходной последовательности, разделение будет хуже.

В случае применения подобной методики для анализа последовательности аминокислот необходима идентификация разделенных соединений, однако возможности ГХ в. данном случае довольно ограничены. Кроме того, что необходимы колонки различной избирательности, нужно знать и относительные удерживаемые объемы исследуемых соединений. Идентификация непосредственно зависит также от доступности подходящего стандарта. Если дипептиды можно синтезировать химически, то для более длинных пептидов это очень трудная задача. Применение ГХ только в целях разделения оправдано лишь тогда, когда выделенные пептидные производные можно уверенно идентифицировать и определить их последовательность с помощью других методов.

Отсюда вытекает несколько следствий. Необходимо, чтобы после разделения компоненты были выделены или каким-то образом стали доступны для последующей идентификации. Поэтому при детектировании на газовом хроматографе вещество не должно разрушаться: для этого либо используют подходящие, обычно менее чувствительные детекторы, либо разделяют смесь газа-носителя с

страница 137
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
учебные центры москвы по графическим прграмамм
ремонт холодильника Nord 244-6-040
Protherm Медведь KLZ 30
световая реклама на крышу автомобиля

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(06.12.2016)