химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

уются тем, что сложные процедуры разделения и идентификации, которые были бы очень дорогостоящими в случае применения других методов, можно выполнить с помощью ГХ за короткое время и с высокой надежностью, причем все это относится и к амино-кислотам-стереоизомерам. Как указывалось при рассмотрении гек-сафтороксазолидинонов, Иле и алло-Иле можно быстро и количественно разделить в 50-метровом стальном капилляре с полифе-ниловым эфиром OS 138 (Perkin-Elmer) при 80° С. Джонсон и др. [42] описали аналогичное разделение Тре и алло-Тре в виде N-аце-тил-к-бутиловых эфиров на колонке длиной 244 см, содержащей 5% карбовакса 1540 на хромосорбе W (60—80 меш) при 146° С. Этот метод с успехом применен для установления структуры цикло-депсипептида [80]. Описано также разделение аминокислот в форме N-ТФА-н-бутиловых эфиров на капилляре с апиезоном!Д93].

ПРОБЛЕМЫ КОЛИЧЕСТВЕННОГО АНАЛИЗА АМИНОКИСЛОТ

Количественный анализ аминокислот методом ГХ представляет . несомненный интерес. Как правило, количественное определение аминокислотного состава пептида является одним из решающих моментов анализа последовательности. Поскольку при деградации крупного белка образуется большое число фрагментов,, желательно затрачивать на анализ каждого из них минимальное количество времени и вещества. Привлечение в данном случае ГХ достаточно хорошо удовлетворяет этим условиям. Многочисленные исследования по ГХ аминокислот в конечном итоге направлены на решение этой задачи. Однако к действительно эффективному количественному методу предъявляются несоизмеримо более высокие ? требования, чем к качественному. Если учесть к тому же трудности получения и разделения производных аминокислот, станет ясно^ почему до сих пор не разработан стандартный метод их количественного определения с помощью газового хроматографа. Основные трудности связаны, как подчеркивалось в разделе о получении производных, с полифункциональными аминокислотами. Метод, игнорирующий их идентификацию, может найти лишь ограниченное применение. Количественный анализ только простых аминокислот не может удовлетворять экспериментатора [40]. Вопрос о том, все ли аминокислоты, встречающиеся в белках, можно определять ГХ с достаточной точностью, все еще остается открытым. Здесь можно только вкратце рассмотреть имеющиеся условия и возможности. Проблемы, связанные с аппаратурой, необходимой для количественной ГХ, уже обсуждались ранее (см. стр. 302).

Целью количественного аминокислотного анализа является определение молярного состава пептида, т. е. типа и количеств входящих в него аминокислот. Выражение молярных отношений аминокислот путем сопоставления содержания данной аминокислоты с соответствующим значением аминокислоты, присутствующей в смеси в наименьшем количестве, хотя и дает верную картину общего состава исходного соединения, не позволяет получить информации о размере, т. е. длине полипептидной цепи. Для этого нужно определить количество хотя бы одной из аминокислот и отнести его к количеству взятого пептида. Естественно, такое определение имеет смысл только при условии, что все аминокислоты, составляющие пептид, обнаруживаются с одинаковой точностью. В таком случае можно работать с одним или несколькими внутренними стандартами, имеющими подходящие удерживаемые объемы, и находить индивидуальные поправочные коэффициенты, специфичные для определяемых производных аминокислот и, как уже упоминалось, в сильной степени зависящие от типа детектора [45, 48]. .

Пики, получаемые в так называемых специфичных детекторах, не отражают структурных отличий компонентов. Эти детекторы реагируют только на одну группу, присутствующую во всех производных. При регистрации метиловых эфиров ДНФ-аминокислот электро-нозахватным детектором наблюдали лишь очень небольшие зависящие от структуры изменения сигнала [54]. Этот детектор специфически реагирует на ДНФ-группу аминокислотных производных. Другой метод измерения, доступный лишь в исключительных случаях, основан на общем превращении различных аминокислот в одно соединение, например метан [3].

Для количественного определения аминокислот в отличие от обычной количественной ГХ важно парциальное содержание в смеси не аминокислотного производного, а исходной аминокислоты. Ошибки всех операций, проводимых перед разделением и идентификацией, оказываются включенными в общую ошибку конечного аналитического результата. Поэтому превращение аминокислот должно быть количественным или по крайней мере количественно воспроизводимым. Большие различия в выходах, даже если они воспроизводимы, заведомо усложнят работу и сделают ее чрезвычайно трудоемкой. Как показано при исследовании образования бутиловых эфиров ТФА-аминокислот, средние выходы для определенных аминокислот почти не отличались друг от друга и составляли около 96% [16, 531. Однако при получении летучих ТФА-метиловых эфиров Ала, Гли и Вал происходили значительные потери вещества даже при аккуратном концентрировании образцов [19, 53]. Если для аминокислотного анализа выбраны производные с высокой летучесть

страница 136
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
помощь адвоката по вопросам исполнительного производства
элитные поселки на новой риге
solea fissler
рейлинги для кухни из германии купить

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(06.12.2016)