химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

аминокислотный анализ можно провести достаточно точно и быстро.

1. ИДЕНТИФИКАЦИЯ И ОПРЕДЕЛЕНИЕ ФТГ-ПРОИЗВОДНЫХ

ФТГ-производные идентифицируют и определяют хроматографией на бумаге либо непосредственно, либо после их разрушения.

ПРЯМАЯ ИДЕНТИФИКАЦИЯ

Фильтровальную бумагу Ватман 1 смачивают крахмальным раствором и высушивают на воздухе. Для хроматографии используют три смеси растворителей: гептан—пиридин (7:3); гептан— бутанОл—муравьиная кислота (4:4: 2); гептан—бутанол—муравьиная кислота (4 : 2 : 4), верхняя фаза.

Восходящая хроматография длится 5—8 ч. Пятна проявляют, опрыскивая бумагу свежеприготовленным иодазидным реактивом: ФТГ-производные дают белые пятна на коричневом фоне..

Примечания. Пятна, получаемые при хроматографии, не имеют четких границ, для них характерны большие «хвосты», образующиеся в результате адсорбции. Проявление пятен не совсем удовлетворительное: специфичность его недостаточна, к тому же пятна быстро исчезают и поэтому промежуток времени, когда можно оценить хроматограмму, очень невелик. Бледные пятна не имеют четких границ. '

НЕПРЯМАЯ ИДЕНТИФИКАЦИЯ [61

ФТГ-производные разрушают в 6 н. НС1 при 150°С (16 ч). Нейтрализованные препараты хроматографируют в бутанольной системе так же, как и свободные аминокислоты.

Примечание. ФТГ-производные Сер, Тре, Цис и Про разрушаются полностью; из ФТГ-Три образуется Гли.

2. ПРИГОТОВЛЕНИЕ ФТГ-АМИНОКИСЛОТ

0,3 ммоля аминокислоты и такое же количество Na2C03 растворяют в 3 мл дистиллированной воды и добавляют 3 мл диоксана, очищенного от перекисей. Затем к смеси приливают 0,1 мл ФТЦ и инкубируют при комнатной температуре 2,5—3 ч. После инкубации для удаления избытка ФТЦ смесь экстрагируют несколько раз сначала циклогексаном, а затем бензолом. Следы бензола удаляют продуванием воздуха, после чего к раствору добавляют НС1 до концентрации 1 М, необходимой для циклизации. Смесь перемешивается при комнатной температуре 3—4 ч, и большинство ФТГ-производных начинает кристаллизоваться. Если кристаллизация не начинается, раствор медленно концентрируют, высушивая под вакуумом. Перекристаллизацию ведут из соответствующего растворителя (табл. 12).

Таблица 12

Растворители, используемые для перекристаллизации фенилтиогидантоииовых производных

ФТГ-аминокислота Растворитель

Ала, Фен, Гли, Мет, Про, Тир, Уксусная кислота — вода

Три, Вал

Асп, Лиз (e-NH2), Глу, амиды Этанол — вода

Гис, Иле, Лей Этанол

Тре Вода

ПРИМЕЧАНИЯ

Циклизация является критическим этапом реакции назависимо от того, идет ли реакция с аминокислотой, с пептидом или с белком. Спектры поглощения ФТК-производного и циклизовэнного ФТГ-производного имеют различные максимумы: 270 и 240 нм соответственно. Поэтому за процессом циклизации можно следить спектрофотометр ически при 240 нм: реакция заканчивается, когда перестает изменяться экстинкция при этой длине волны. Если циклизация идет слишком медленно, процесс можно ускорить, увеличив концентрацию кислоты или осторожно нагревая смесь. Однако нужно помнить, что существуют устойчивые пептидные связи, циклизация которых идет очень медленно или не идет вообще.

Ж. ОПРЕДЕЛЕНИЕ N-КОНЦЕВОЙ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ С ПОМОЩЬЮ ЛЕЙЦИНАМИНОПЕПТИДАЗЫ

Под действием лейцинаминопептидазы (ЛАП) отщепляется N-концевой аминокислотный остаток белка или пептида. Место атаки фермента показано на следующей схеме:

Ri R2 R3

I I I ЛАП

H„N—CH—CO—NH—CH—CO—NH—CH—CO >> H2N—СН—СООН + H2N—СН—СО—NH-—СН—СО

МЕТОДИКА

Выделение лейцинаминопептпидазы. Фермент выделяют модифицированным методом Хилла и др. [10] из свежих почек свиньи.

а) Приготовление ацетонного порошка. 3 кг свежих почек свиньи измельчают мясорубкой и гомогенизируют в 1,5 л дистиллированной воды, которую добавляют порциями (6 раз). Гомо-генат охлаждают до 4°С, после чего приливают 4500 мл 53%-ного холодного этанола и оставляют стоять 1 ч. К смеси добавляют 1800 мл 95%-ного этанола, содержащего 180 мл хлороформа, и вновь оставляют стоять 30 мин. После этого гомогенат фильтруют на холоду через бумагу, что занимает несколько часов.

На следующий день к осадку добавляют 2 объема холодного ацетона и смесь фильтруют на бюхнеровской воронке. Осадок вновь суспендируют в 2 объемах ацетона и фильтруют, как и раньше, на холоду. Затем осадок суспендируют в 0,25 объемах -смеси ацетон— эфир (1 : 1), фильтруют и промывают на воронке 0,25 объемами эфира. Последнему как можно быстрее дают возможность испариться при комнатной температуре и материал высушивают окончательно, помещая его в вакуумный эксикатор на несколько часов. Таким способом из 3 кг почек получают около 450 г порошкообразного материала.

6} Фракционирование сульфатом аммония. 600—800 г ацетонового порошка гомогенизируют в 10 объемах дистиллированной воды 1 мин при комнатной температуре; далее, однако, все операции проводят при 4°С.

Гомогенат центрифугируют, надосадочную жидкость охлаждают и плотный осадок экстрагируют, повторно гомогенизируя его в 1 объеме холодной дистиллированной воды. Экстракты объединяют и раз

страница 117
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
ar001 кресло-качалка komodo
шторки на номера авто
надувная горка детская
фреоновые охладителиkorf

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(29.03.2017)