химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

направления тока растворителей. '

ДНС-Арг определяют в реакции Сакагуши. ?ыс-ДНС-Лиз и бис-ДНС-Тир можно разделить хроматографией во втором направлен нии в системе 2-бутанон—пропионовая кислота—вода (15 : 5 : 6). '

ДНС-производное N-концевого Три полностью разрушается в ходе гидролиза. Поэтому полностью отрицательный результат в опытах по дансилированию аминокислот может свидетельствовать о том, что на N-конце присутствует Три. ДНС-Три можно легко определить после гидролиза химотрипсином. Все три производных Тир (бис-ДНС-Тир, О-ДНС-Тир иа-ДНС-Тир) обычно определяются без труда, однако из-за плохой растворимости в воде бис-производное часто не обнаруживается, хотя известно, что оно присутствует в смеси. В таких случаях гидролизат растворяют в пиридине и переносят на бумагу или тонкослойную пластинку. Для ДНС-КМ-Цис характерны особенно большие потери в ходе гидролиза, поэтому следует брать для анализа больше материала, если предполагается, что эта аминокислота должна находиться на конце пептида.

3. ПРИГОТОВЛЕНИЕ ДНС-АМИ НО КИСЛОТ

ДНС-аминокислоты, необходимые для контрольных растворов, не обязательно выделять во всех случаях в чистом кристаллическом виде. Вполне достаточно дансилировать раствор аминокислот, лак это описано ниже, без выделения их из раствора. Такие побочные продукты, как ДНС-ОН и ДНС-ЬШ2, не мешают идентификации, и поэтому их можно не удалять из смеси.

Метод выделения, описанный ниже для ДНС-Ала, можно использовать также для получения следующих гомогенных кристаллических производных: ДНС-Гли, ДНС-Вал, ДНС-Лей, ДНС-Иле, ДНС-Фен, ДНС-Сер, ДНС-Тре, ДНС-Про, ДНС-Мет, ДНС-Мет S02, ДНС-Цис, ДНС-Асп и ДНС-Глу.

150 мг аланина растворяют в 5 мл 1 М бикарбоната натрия. К этому раствору при сильном перемешивании добавляют 100 мг ДНС-С1, растворенного в 5 мл ацетона. Если часть ДНС-С1 выпадает в осадок, его растворяют, добавив 0,2 мл триметиламина. После 10 мин перемешивания реакционную смесь экстрагируют бутил-ацетатом (3 раза по 7 мл) для удаления ацетона, ДНС-гШ2 и не-прореагировавшего ДНС-С1. рН водной фазы доводят 2 н. НС1 до 3,4 и ДНС-Ала экстрагируют бензолом (3 раза по 5 мл). К бензольному экстракту осторожно добавляют по каплям пиперидин до помутнения и оставляют на холоду. Перекристаллизацию проводят из бутил ацетата.

В. ОПРЕДЕЛЕНИЕ N-КОНЦЕВОЙ АМИНОКИСЛОТНОЙ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ В РЕАКЦИИ С ФЕНИЛИЗОТИОЦИАНАТОМ

Деградация с помощью фенилизотиоцианата (ФТЦ) была предложена Эдманом [4, 5]. Основные стадии реакции с ФТЦ представлены на схеме (стр. 282); ФТЦ, взаимодействуя со свободными

R« Иг

СН—CO—NH—СН—CO—NH...

CH—CO—NH—CH—CO—NH...

реакции второй остаток пептидной цепи так же образует ФТК-производное и может быть идентифицирован.

Многократное повторение реакции Эдмана, таким образом, позволяет определить N-концевую аминокислотную последовательность изучаемого пептида. Этот метод имеет исключительно большое значение при определении последовательности пептидов, изолированных из ферментативных гидролизатов, и, следовательно, при выяснении первичной структуры белков с высоким молекулярным весом.

Деградация с помощью ФТЦ проводится в несколько стадий: 1) добавление ФТЦ, 2) циклизация ФТК-производного, 3) экстрагирование свободного ФТГ-производного, 4) идентификация и определение ФТГ-производного или анализ укороченного пептида, 5) повторная деградация, идентификация и т. д. Из-за различной растворимости белков и пептидов приходится проводить реакцию Эдмана с ними в разных экспериментальных условиях.

ФТГ-производные могут быть идентифицированы прямым или непрямым путем. Прямая идентификация достигается хроматографией ФТГ-фракций. При непрямой идентификации ФТГ-произ-водные сначала разрушают добавлением Ва(ОН)2 или б н. HQ, а затем определяют полученные свободные аминокислоты. Непрямой метод непригоден - для количественного анализа, так как при такой обработке происходит сильное разрушение веществ.

При изучении небольших пептидов подходящим методом аминокислотного анализа, например с помощью автоматического аминокислотного анализатора, можно достаточно определенно установить состав пептида, лишенного своей концевой группы. Проследив за изменением аминокислотного состава на последовательных этапах деградации., можно восстановить аминокислотную последовательность изучаемого пептида.

Деградацию по Эдману можно комбинировать с дансильным методом. При этом после отщепления концевого остатка определяют N-конец оставшегося пептида и воспроизводят последовательность, основываясь на данных.N-концевого анализа.

Г. ДЕГРАДАЦИЯ БЕЛКОВ С ПОМОЩЬЮ ФТЦ

Белок, растворенный в гуанидинхлориде, реагирует с ФТЦ и в кислой среде происходит циклизация и отщепление N-концевой аминокислоты, которую можно экстрагировать, а затем определить как ФТГ-производное.

МЕТОДИКА

100 мг белка растворяют или суспендируют в 5 мл дистиллированной воды, добавляют равный объем двоксана и в автотитраторе доводят рН до 8,7—8,8 0,1 М NaOH. К раствору (или суспензии), постоянно перемешивая его, при комнатн

страница 115
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
плазма аренда
Рекомендуем компанию Ренесанс - чердачная лестница складная - продажа, доставка, монтаж.
офисное кресло престиж
Рекомендуем приобрести в КНС Нева WS-C3750X-48T-S - быстро, качественно и надежно! г. Санкт-Петербург, ул. Рузовская, д.11.

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(10.12.2016)