химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

сходятся друг с другом; таким образом избегают прямого увлажнения стартовой линии.

Электрофорез проводят в горизонтальном аппарате при градиенте напряжения 80 В/см. Сила тока при ширине пластинки 10 см должна быть 50— 60 мА. После 20—25 мин электрофореза пластинку вынимают, высушивают струей теплого воздуха и проводят идентификацию ДНС-аминокислот в ультрафиолете.

Электрофореграмма показана на фиг. 63. Разделение Фен, Иле и Лей может представить известные трудности, так же как идентификация основных ДНС-аминокислот и разделение бис-ДНС-Лиз и бис-ДНС-Тир. Для разделения Фен, Иле и Лей нужно на другой пластинке сначала провести электрофорез, а затем хроматографию в перпендикулярном направлении в системе бензол—пиридин— уксусная кислота (80 : 20 : 2). Такой процедурой ДНС-Фен идентифицируется с полной определенностью, а ДНС-Иле и ДНС-Лей разделяются очень четко. ДНС-Гис определяют с помощью реакции Паули сразу же после электрофореза; таким способом его дифференцируют от других производных основных аминокислот: ДНС-Лиз и ДНС-Apr.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ ДНС-АМИНОКИСЛОТ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИЕЙ НА ПОЛИАМИДНЫХ ПЛАСТИНКАХ [18]

Все ДНС-аминокислоты могут быть определены с большой степенью достоверности тонкослойной хроматографией на полиамидных пластинках. Идентификация обеспечивается тем, что полиамидные пластинки устроены по принципу «сэндвича», т. е. обе стороны поддерживающей пластинки покрыты тонким слоем полиамида. На одной стороне пластинки хроматографируют изучаемую ДНС-аминокислоту, а на другую наносят контрольную смесь аминокислот. Пользуясь прозрачностью пластинки, после хроматографии можно определить неизвестную ДНС-аминокислоту.

Последовательность операций в данном методе следующая. В одном из углов пластинки на расстоянии 1 см от краев отмечают стартовую точку. Необходимо проследить за тем, чтобы эта точка была в одном и том же месте с обеих сторон. Затем гидролизат, приготовленный описанным выше способом, растворяют в 20 мкл 50%-ного пиридина и половину его наносят на одну, а половину — на другую сторону, все время подсушивая раствор; важно наносить материал действительно в виде точки. Затем на одну сторону пластинки наносят контрольную смесь аминокислот, состоящую из следующих компонентов: ДНС-Сер, ДНС-Глу, ДНС-Про, ДНС-Гли, ДНС-Иле, быс-ДНС-Тир, ДНС-Арг. В контрольной смеси, 1 мкл которой наносят в место старта, концентрация каждого производного равна 1 нмоль/мкл.

Обычно для идентификации аминокислот необходимо провести хроматографию в трех системах растворителей: I — 1,5%-ная муравьиная кислота; II — бензол—уксусная кислота (9 : 1); III — этилацетат—метанол—уксусная кислота (10 : 1 : 1). В некоторых случаях при идентификации е-ДНС-Лиз, а-ДНС-Гис и ДНС-Арг может оказаться необходимой четвертая система: IV — 0,05 М Na3P04 — этанол (3 : 1). Для идентификации ДНС-цистеиновой кислоты требуется пятая система растворителей: V—1 М NH4OH— этанол (1 : 1).

Исследуемые образцы сначала в течение 30 мин хроматографируют в растворе I, а затем, после высушивания пластинки феном, в течение 60 мин в перпендикулярном направлении в системе II. Пластинку опять высушивают и проверяют разделение компонентов в ультрафиолете. Хроматографию в системе III (в том же направлении, что и в системе II) проводят лишь тогда, когда необходимо идентифицировать ДНС-Тре и ДНС-Сер или ДНС-Асп и ДНС-Глу. В этом случае хроматография продолжается 45 мин. Если в смеси присутствует ДНС-Цис S03H, то после хроматографии в системе II пробы хроматографируют в течение 40 мин в том же направлении в системе V. Для разделения е-НН2-ДНС-Лиз, a-NH2-ДНС-Гис и ДНС-Арг после хроматографии смеси в системе II ее хроматографируют в течение 45 мин в системе IV.

Распределение пятен на хроматограмме показано на фиг. б4.: Полиамидные пластинки можно применять несколько раз, если их тщательно отмывать после каждого опыта следующим образом: пластинку погружают в 50%-ный ацетон, содержащий 1 М NH4OH, стараясь не касаться стенок сосуда, и отмывают 2 ч, постоянно перемешивая отмывающий раствор. После высушивания пластинки

ДНС-Про А

ДНС-Иле ДНС-Лей<^> Д"™*»

бис-ДНС-Тир CD MHCMerSQ^^

к nun „ ДНС-Фен *>^?}ДНС-Ала

бис-ДНС-Лизм >< ДНС-Mem S02

II

О ЛНС-ШтО ДНС-Гли О s~\ *ДНС~Гис

Старт МС-Ци&ф днс-Асп «-ДНС-Лизу-** ДНС-Глу

днс-ше жы^т-т, В

ДНС-Фен ^ ДНС-Вал Q ОУ pZTДНС-Вал-Вал

ЛНС-Иле^ <=>АНС-Ала

Guc-ДНМиз (^ДНС-Гли

ОДНС-Тир ДНС-Тре ДНС-МетЪ02

сс-ДНС-Тир О <2Ч О

II +7/7 О ДНС~ГЩ<С^> тЙУСеа

ДНС-КМ-Цис(^ Г* О «-ДНС-Гис

Cmapm ^ ДНС-ЦисЩН а-ДНС-Лиз

Фиг. 64. Идентификация ДНС-амииокислот хроматографией в тонком полиамидном слое.

Растворители: /—1,5%-иая муравьиная кислота, //—беизол — уксусная кислота (9:1), III — этилацетат — метанол — уксусная кислота (10:1:1, по объему). Сокращения: КМ-Цис — 8-карбоксиметилцнстеии; Цнс SO3H — цистеииовая кислота, Мет SO — метиоииисульфоксид, Мет S02 — метиоииисульфои.

можно использовать вновь, при этом лучше придерживаться одного

и того же

страница 114
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
яндекс комфорт какие машины
ракетки для бадминтона в ярославле
купить кровать 190 190
металлические стеллажи для дома

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(24.03.2017)