химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

NaOH и РА-ИДЕНТИФИКАЦИЯ ДНС-АМИНОКИСЛОТ

ДНС-аминокислоты могут быть идентифицированы с помощью электрофореза на бумаге или в тонком слое, а также с помощью тонкослойной хроматографии.

ю*

ИДЕНТИФИКАЦИЯ ДНС-АМИНОКИСЛОТ С ПОМОЩЬЮ ЭЛЕКТРОФОРЕЗА

НА БУМАГЕ

Для идентификации ДНС-аминокислот необходимо провести электрофорез несколько раз. Сначала его осуществляют в пиридин-ацетатном буферном растворе рН 4,38 (фиг. 62). В данном случае важно, чтобы рН был именно 4,38, так как отклонение от этого значения даже на 0,02 единицы заметно влияет на качество разделения,

4•, KM-UuC 4Глу щ • ^СП

АНС-0Н- •MemWz ГлиФ •ДНС-ОП

У* •Тре

ее-Тирт » Три Sue-Tup^ f 5UC-/!U3

riu # Ала •

. Сер

т

Р 0 0~Тир •

Гис • # t-Лиз

Арг • • ДНС-Ш2 • ct-Лиз

+

• Вал

m Иле

m фен

t

О

4^-pfMfl

В

Г

Фнг. 62. Идентификация ДНС-амниокислот хроматографией на бумаге. А. Электрофорез при рН 4, 38. Б, В, Г. Электрофорез при рН 1,9.

Буферный раствор состоит из 32 мл уксусной кислоты, 18 мл пиридина и 1950 мл дистиллированной воды. Стартовая точка находится на расстоянии одной трети длины листа от катода. Гидролизат наносят на сухую бумагу, причем стартовое пятно должно быть как можно меньше. Электрофорез продолжается ПО мин при градиенте напряжения 80 В/см. Если нет высоковольтной аппаратуры, то можно работать при среднем напряжении, пропорционально увеличив продолжительность электрофореза. Аппарат с непосредственным жидкостным охлаждением нельзя применять для первого электрофореза, поскольку ДНС-производные Про, Вал, Иле, Лей, Фен и Тир могут быть экстрагированы органическими растворителями.

Отдельно готовят два контрольных раствора ДНС-аминокислот. Один из растворов (0) содержит ДНС-КМ-Цис, ДНС-Асп, ДНС-Мет502, ДНС-Про, ДНС-Тре, ДНС-Вал, ДНС-Фен, ДНС-Три, бш>ДНС-Лиз,а-ДНС-Лиз, е-ДНС-Лиз, ДНС-Ш2. Другой раствор (Р) содержит ДНС-Цис-803Н, ДНС-Глу, ДНС-Гли, ДНС-Сер, ДНС-Ала, ДНС-Лей, ДНС-Иле, а-ДНС-Тир, ДНС-Гис, ДНС-Арг, О-ДНС-Тир, бис-ДНС-Тир. Из этих растворов, в которых концентрация каждого производного равна 5 мкмоль/мл, для нанесения отбирают по 1 мкл.

После электрофореза бумагу следует тщательно высушить в сушильном шкафу при 100°С. Даже небольшое количество влаги или пиридина может вызвать сильное тушение флуоресценции, что заметно снизит чувствительность метода. Рекомендуется также установить за ультрафиолетовой лампой фен и обдувать теплым воздухом бумагу в ходе определения.

Иногда разделение ДНС-Гли, ДНС-Ала и ДНС-Сер происходит неудовлетворительно. То же относится и к группе производных ДНС-Иле, ДНС-Вал и ДНС-Фен, а в присутствии сильного пятна ДНС-NHa также и к группе ДНС-Гис, ДНС-Арг, <* -ДНС-Лиз и е-ДНС-Лиз.

Идентификацию ДНС-Гли, ДНС-Сер и ДНС-Ала может осложнить сопутствующее пятно ДНС-ОН, однако все эти четыре компонента хорошо разделяются электрофоретически при рН 1,9. Участок электрофореграммы, содержащий эти четыре компонента (фиг. 62, Б), вырезают, пришивают к другому листу фильтровальной бумаги и проводят электрофорез при рН 1,9. На фиг. 62, Б показано распределение производных, полученное в этих условиях. Зоны, содержащие основные ДНС-производные (фиг. 62, В) и ДНС-Вал, ДНС-Иле, ДНС-Фен (фиг. 62, Г), анализируют таким же образом.

Если на N-конце белка или пептида находятся Вал или Иле, картина может осложниться из-за появления флуоресцирующих пептидов ДНС-Вал-Х и ДНС-ИЛе-Х благодаря устойчивости к гидролизу пептидных связей Вал-Х и Иле-Х. Подвижность этих производных отличается от подвижности ДНС-Вал и ДНС-Иле, и в результате может возникнуть ложное представление о гетерогенности исследуемого пептидного препарата. В таких случаях рекомендуется увеличить продолжительность гидролиза.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ ДНС-АМИНОКНСЛОТ ЭЛЕКТРОФОРЕЗОМ

В ТОНКОМ СЛОЕ [16]

ДНС-аминокислоты быстро и надежно могут быть идентифицированы с помощью электрофореза в тонком слое. В настоящее время в продаже имеются готовые для употребления тонкослойные пластинки для электрофореза (например, MN-полиграм, SH N-HR, фирма Macherey-Nagel Со, ФРГ).

На пластинку размером 20 х 10 см в место старта, отмеченное на расстоянии 8 см от катода, наносят гидролизат ДНС-пептида при постоянном подсушивании. Контрольные аминокислотные смеси имеют следующий состав. Раствор К: ДНС-Цис S03H, ДНС-Асп, ДНС-Сер, ДНС-Тре, ДНС-Про, а-ДНС-Тир, ДНС-Фен, бис-ДНС-Лиз, ДНС-Apr, ДНС-Лей, е-ДНС-Лиз, а-ДНС-Лиз. Раствор L: ДНС-КМ-Цис, ДНС-Глу, ДНС-Гли, ДНС-Ала, ДНС-Мет, ДНС-Вал, быс-ДНС-Тир, О-ДНС-Тир, ДНС-Иле, ДНС-Гис.

Буферный раствор в конечном объеме 1 л содержит 12 мл уксусной кислоты и 8 мл пиридина (рН 4,5). Увлажнение пластинки проводят следующим образом: буферный раствор наливают в стеклянную камеру или фотографическую кювету и осторожно погружают в него пластинку. Когда уровень раствора достигнет стартовой линии, пластинку вынимают и после удаления избытка раствора промоканием вновь погружают в раствор другой стороной. Сама стартовая линия смачивается только тогда, когда оба фронта жидкости

страница 113
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
Ножи Сантоку Kasumi
чехол от дождя на садовые качели варадеро
цены на скородки fissler
склад индивидуального хранения дешево

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(29.03.2017)