химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

ДНФБ. Реакция заканчивается за 30— 50 мин, на что указывает полное растворение компонентов реакционной смеси. Смесь подкисляют, добавляя несколько капель концентрированной НС1. ДНФ-аминокислоты перекристаллизовывают из соответствующих растворителей (табл. 11).

Таблица 11

Растворители для перекристаллизации ДНФ-аминокислот

ДНФ- аминокислота Растворитель

Ала, Цис, (Цнс)2, Фен, Глу, Мет, Лей, иорВал, оксиПро, Про, Тре, Вал

Асн, Гли, Глу, Сер Apr, Гис Лиз, Тир, Три р-Ала Эфир— петроленный эфир

Метанол—- вода Ацетон — вода Ацетон — эфир Этанол — вода

ПРИМЕЧАНИЯ

Некоторые аминокислоты при подкислении отделяются в виде маслообразного материала, который осаждается ацетоном. Полученную суспензию разводят ацетоном, обезвоживают безводным Na2S04, отфильтровывают, большую часть ацетона упаривают, а ДНФ-аминокислоту осаждают бензолом и петролейным эфиром. Если материал еще имеет маслянистую консистенцию, всю процедуру повторяют. Осадок ДНФ-аминокислот перекристаллизовывают из соответствующего растворителя.

8. ПРИГОТОВЛЕНИЕ е-ДНФ-ЛИЗИНА

a-NH2-rpynny блокируют ионами Си2+ и e~NH2-rpynny дини| трофенилируют в слабощелочной среде. После удаления ионов! Си2+ выделяют e-N-ДНФ-производное [14].

МЕТОДИКА

0,5 г лизина растворяют в 10 мл дистиллированной воды, раст4 вор доводят до кипения и добавляют к нему небольшими порциями^ CuC03. Избыток CuC03 удаляют фильтрованием, а к раствору добавляют 1,5 г NaHC03 и 1,5 г ДНФБ, растворенного в 20 мл этано-3 ла. Смесь встряхивают при комнатной температуре 2 ч и фильтруют. Осадок промывают дистиллированной водой, этанолом и наконец эфиром, а затем суспендируют в 5 мл дистиллированной воды, подкисляют несколькими каплями 1 н. НС1 и сосуд с прозрачным раствором помещают в измельченный лед. Через охлажденный раствор пропускают сероводород для удаления ионов Си2+. Осадок CuS удаляют фильтрованием после адсорбции его активированным .углем. Прозрачный фильтрат высушивают в вакууме и ДНФ-про-изводное перекристаллизовывают из 6 н. НС1.

ПРИМЕЧАНИЯ

S-N-ДНФ-производное орнитина можно получить аналогичным образом. a-N-ДНФТис очень быстро образуется при добавлении небольшого количества ДНФБ, а динитрофенилирование ацетильного производного дает N-ДНФ-Гис.

Б. ОПРЕДЕЛЕНИЕ N-КОНЦЕВЫХ АМИНОКИСЛОТ ДАНСИЛЬНЫМ МЕТОДОМ [7,8]

Аминогруппы белков и пептидов реагируют с флуоресцентным красителем диметиламинонафталинсульфонилхлоридом (сокращенно дансилхлорид) в щелочной среде. Как и при динитрофенилиро-вании, связь аминокислоты с реагентом не разрушается при гидролизе, и поэтому ДНС-аминокислоты можно идентифицировать в гидролизатах дансилированного белка (ДНС-белок) или пептида. Такие гидролизаты содержат а-ДНС-аминокислоты, образовавшиеся из N-концевыхаминокислот, и е-ДНС-Лиз и О-ДНС-Тир, образовавшиеся из остатков Лиз и Тир, расположенных внутри цепи. Кроме того, дансилхлорид, реагируя с аммиаком, присутствующим в растворе, дает ДНС-сульфонамид (ДНС-ЫН2), а в результате гидролиза сульфонилхлоридной группы образуется ДНС-сульфоновая кислота (ДНС-ОН).

Одно из преимуществ дансилирования по сравнению с динитро-фенилированием состоит в том, что после кислотного гидролиза ДНС-белка аминокислоты могут быть идентифицированы электрофор етически или хроматографически сразу после расщепления белка без экстракции гидролизата. Другим преимуществом является очень высокая чувствительность. Максимум возбуждения флуоресценции ДНС-аминокислот находится около 550 нм, их флуоресценция настолько интенсивна, что с помощью электрофореза на бумаге легко можно определить 1—5, а с помощью тонкослойной хроматографии 0,2—1,0 нмоль ДНС-производного.

МЕТОДИКА

ТЕХНИКА ДАНСИЛИРОВАНИЯ 19]

В маленькую пробирку с внутренним диаметром около 3—4 мм и длиной 25—30 мм вносят в зависимости от метода идентификации от 0,3 до 5,0 нмоль препарата. Объем раствора измеряют калиброванным капилляром. Чтобы избежать больших потерь при малом объеме проб (5—20 мкл), следует переместить капли исследуемого материала со стенок на дно пробирки с помощью непродолжительного центрифугирования при 2000—3000 об/мин. Затем раствор пептида высушивают в вакуумном эксикаторе, высушенный образец растворяют в 10 мкл 0,2 М NaHC03 при осторожном встряхивании и вновь высушивают в вакууме.Цель высушивания в данном случае состоит в удалении аммиака, который мешает реакции. К сухому остатку добавляют 10 мкл деионизованной воды (свободной от аммиака), растворяют при осторожном.встряхивании и затем добавляют 10 мкл раствора, содержащего 2 мг/мл ДНС-СЬреагента в ацетоне. Смесь осторожно встряхивают, пробирку закрывают, пара-фильмом и помещают в термостат при 37Х. О завершении реакции можно узнать по исчезновению желтой окраски — обычно это происходит через полчаса. После этого реакционную смесь высушивают, добавляют 30 мкл 6 н. НС1, пробирку запаивают и препарат гидролизуют 10—18 ч при 105°С. После гидролиза пробу центрифугируют для того, чтобы капли раствора со стенок попали на дно, затем пробирку осторожно открывают и высушивают в вакууме над

страница 112
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
airwheel z3t
кресло качалка для дачи
сковорода гриль chasseur
смесительный узел smex 40-1.0 нагреватель

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(29.03.2017)