химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

спирт— уксусная кислота (70:30:3); в) бензол — пиридин — уксусная кислота (80 : 20 : 2); г) хлороформ—метанол—уксусная кислота (95 : 5 : 1). Для идентификации достаточно примерно 0,2—0,5 мкг ДНФ-аминокислоты. Распределение ДНФ-аминокислот при двумерной хроматографии в различных системах растворителей показано на фиг. 61.

ДНА

t5uc-Tup

бис-Гис мет* Вал

<*тРе

Асл*С*> + • Тли

Старт

+Ала

• Про

Тли • Тре . *Сер

Асп гпн

Старт

Фиг. 61. Идентификация ДНФ-амииокнслот тонкослойной хроматографией

на силикагеле.

Раствор /: толуол — пиридин — этиленхлоргидрин — 0,8 М. аммиак (100 : 30 : 60 : 60). Раствор 2: хлороформ ~ бензиловый спирт—уксусная кислота (70 : 30:3), Раствор 3: бензол — пиридин — уксусная кислота (80 : 20 : 2). Раствор 4: хлороформ — метанол — уксусная кислота (95 : 5 : 1). ДНА — динитроанилин, ДНФ — динитрофеиол.

5. НЕПРЯМАЯ ИДЕНТИФИКАЦИЯ ДНФ-АМИНОКИСЛОТ

ДНФ-аминокислоты разрушают в реакции аммонолиза и полученные свободные аминокислоты идентифицируют хроматографией на бумаге [12].

МЕТОДИКА

Фракцию, содержащую ДНФ-производное в метаноле или этил-ацетате, высушивают, суспендируют в небольшом объеме воды и опять высушивают для удаления следов органического растворителя. Затем остаток растворяют примерно в 50-кратном избытке концентрированного раствора аммиака и переносят в толстостенную ампулу, которую запаивают и выдерживают при 105°С в течение 4—8 ч. Содержимое пробирки высушивают в вакуумном эксикаторе над Рг05 и КОН, растворяют в нескольких каплях водыи хроматографируют на бумаге Шляйхер-Шуль 2043 b в бутанольной системе в направлении сверху вниз.

ПРИМЕЧАНИЯ

1. В бутанольной системе большинство окрашенных в желтый цвет продуктов деградации, образуемых при аммонолизе, мигрируют с фронтом растворителя, и поэтому необходимо, чтобы растворитель дошел до конца листа.

2. ДНФ-производные аминокислот, содержащих серу и окси-группу, частично разрушаются. В процессе аммонолиза разрушаются и некоторые другие аминокислоты, поэтому инкубация с аммиаком должна быть по возможности непродолжительной. Время, необходимое для этой реакции, подбирают, анализируя небольшие аликвоты образцов. Как правило, через 4 ч большая часть ДНФ-производных превращается в свободные аминокислоты.

3. Аммонолиз нельзя применять для количественных определений, но это очень хороший и быстрый метод качественного анализа.

6. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ДНФ-ПРОИЗВОДНЫХ

ДНФ-фр акцию, полученную из смесей с известным количеством белка или пептида, хроматографируют вместе с определенным количеством контрольных ДНФ-аминокислот, после чего ДНФ-амино-кислоты элюируют из бумаги и определяют их содержание фотометрически по калибровочной кривой, построенной для ДНФ-аминокислот. Таким способом можно определить концевые группы белков и пептидов, число полипептидных цепей белков, минимальный молекулярный вес белков и аминокислотный состав белковых гидролизатов.

МЕТОДИКА

А. Определенное количество контрольного ДНФ-производного гидролизуют в 6 н. НС1 в тех же условиях, в которых проводили гидролиз ДНФ-белка или ДНФ-пептида. Гидролизат экстрагируют эфиром, органическую фазу упаривают и растворяют в небольшом измеренном количестве метанола. Аликвоты такого контрольного раствора наносят на бумагу.

Б. Известное количество изучаемфй ДНФ-фракции хроматографируют на бумаге в условиях, необходимых для данного ДНФ-производного. Пробы контрольного препарата, содержащие различное количество вещества, хроматографируют на том же листе бумаги. По окончании хроматографии пятна ДНФ-аминокислот вырезают вместе с контрольными, бумагу измельчают на мелкие кусочки и помещают в пробирки. В каждую пробирку наливают по 5 мл 1 %-ного раствора NaHC03 и в течение 30 мин при периодическом встряхивании в темноте производят элюирование проб. Экстинкцию растворов при 360 нм измеряют в спектрофотометре. Содержание ДНФ-аминокислот в исследуемой фракции определяют по калибровочной кривой, построенной для контрольных образцов.

ПРИМЕЧАНИЯ

1. Использование контрольных проб, обработанных так же, как изучаемые образцы, устраняет ошибки, связанные с разрушением в ходе гидролиза. Поскольку содержание ДНФ-производных определяют по калибровочным кривым, построенным для контрольных образцов, с которыми проводились точно те же операции, что и с исследуемыми образцами, ошибки за счет неконтролируемых.

факторов метода (разрушение под действием света, потери в ходе приготовления и экстракции и др.) компенсируются.

2. ДНФ-Про фотометрируют при 385 нм, а ДНФ-пептиды — при 350 нм.

^3. Если пользуются ранее построенными калибровочными кривыми, с помощью поправочных коэффициентов их следует привести к условиям данного эксперимента.

7. ПРИГОТОВЛЕНИЕ ДНФ-АМИНОКИСЛОТ

При встряхивании смеси ДНФБ и аминокислот в спиртовом щелочном растворе образуются ДНФ-производные аминокислот.

МЕТОДИКА

10 ммолей аминокислоты растворяют или суспендируют в 40 мл воды и добавляют 2 г безводного Na^CO^ Раствор нагревают до 40° С и добавляют 10 ммолей

страница 111
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
рассрочка коттеджный поселок на 10 лет новая рига
Asus Maximus IX Apex
театр новая опера афиша
кинозалы для загородного дома

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(19.09.2017)