химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

м раствором Na^C03 для удаления кислоты, затем обезвоживают с СаС12 и повторно перегоняют.

Подготовка стеклянной камеры для хроматографии на бумаге. Хроматографию проводят в темноте при постоянной температуре в стеклянном цилиндре высотой 46 см и диаметром 23 см, на дно которого помещают один в другой два кристаллизатора диаметром 15 и 19 см.

Размер листа фильтровальной бумаги. Размер и форма листа фильтровальной бумаги, так же как и место нанесения образца при двумерной хроматографии на бумаге, показаны на фиг. 57.

Приготовление фосфатного буферного раствора. Для хроматографии необходим 1,5 М фосфатный буферный раствор рН 6, который готовят следующим образом: 138 г NaH2P04 .< Н20 и 71 г Na2HP04 растворяют в теплой воде и доводят объем до 1 л.

зм фосфат

10 см

5 о

5 «и

е

о

а -о

Приготовление толуольной системы. 60 мл толуола, 18 мл пиридина, 36 мл этиленхлоргидри-на и 36 мл 0,8 М аммиака тщательно взбалтывают в делительной воронке и оставляют на несколько часов. Нижнюю водную фазу отбрасывают, а органическую фазу фильтруют через бумагу для удаления капель воды.

53,5 см

55см

Хроматография. После нанесения образца бумагу сворачивают в цилиндр и помещают между

А ~ , двумя кристаллизаторами в оргаФиг. 57. Размеры листа фильтро- J r « r г »

вальной бумаги для хроматогра- ническую фазу смеси растворителей

фии ДНФ-аминокислот [п]. через 6 ч после того, как органи

ческая фаза была налита во внешнее пространство, а 200 мл 0,8 М аммиака — во внутреннее. Восходящая хроматография длится 15 ч, после чего хроматограмму высушивают при 40—50° С. Затем проводят нисходящую хроматографию в другом направлении в уже упомянутом фосфатном буферном растворе.

Распределение ДНФ-аминокислот при двумерной хроматографии показано на фиг. 58. При анализе сложных смесей неизвестного

о

to

Толуольная система

Тир о О Лиз

бис-Гис

ОЦис

ДНФ-ОН

ГлиО !

АлаО

CD Фен О Мет

CD Лей

О

О Сер Зал л О Про ОТ ре

НО-Про

()Uy \JAcn

0 ДНФ- Глу

0 ДНФ-Сер

О ДНФ-Гли О ДНФ-Тре

0 ДНФ-Ала

О ДНФ-Фен О ДНФ-Вал О ДНФ-Лей

Фиг. 58. Двумерная хроматография ДНФ-аминокислот [ill:

Фиг. 59.' Хроматография ДНФ' аминокислот в нитратном буферном растворе.

состава идентификацию проводят с помощью одновременно приготовленных одномерных контрольных хроматограмм.

Б. Цитратный метод Ровери [15]. Большая часть ДНФ-аминокислот может быть разделена в 1 М цитратном буферном растворе рН 6,4 (фиг. 59). Метод особенно удобен для количественных определений в случае не очень сложных смесей, например смеси нескольких ДНФ-аминокислот и ДНФ.

В. Система третичный амиловый спирт — фталат [/].

/) Приготовление фталатного буферного раствора. 22,45 г бифталата калия суспендируют в 220 мл воды, который растворяется в этом объеме при добавлении 4 г NaOH, перемешивании и слабом нагревании. Если это необходимо, раствор фильтруют и затем разводят в 10 раз водой. Проверяют рН раствора и, если он не равен 6,0, доводят его до этого значения разбавленными растворами NaOH или уксусной кислоты. Отклонения рН на 0,1—0,2 единицы не существенны для хроматографии.

При использовании фталатного буферного раствора рН 5 разделение ДНФ-аминокислот значительно отличается от фракционирования в буферном растворе рН 6. При рН 5 хорошо разделяются ДНФ-Асп и ДНФ-Глу, тогда как в других условиях они движутся вместе.

Q бис-ДНФ-Лиз 0 ДНФ-Три 0 ДНФ-Гли 0 ДНФ-Фен

. . Приготовление фталатного буферного

раствора рН 5. 50 мл ОД М раствора

Г\ к пит л бифталата калия смешивают с 23,9 мл

U йисднФ-ли* 0l н NaQH и смесь разводят д0 100мл

дистиллированной водой.

ДНФ-Ала

ДНФ-Мет

ДНФ-Сер

ДНФ-Вал ДНФ-Аей

ДНФ-Тир ДНФ-Глу ДНФ-Тре

О О

о

О ДНФ-Асп

2) Приготовление смеси растворителей. В делительную воронку на 1 л наливают 300 мл третичного амилового спирта и 300 мл фталатного буфера. Смесь тщательно встряхивают и оставляют отстаиваться несколько часов. Затем фазы отделяют друг от друга, органическую фазу фильтруют через бумагу и наливают в хроматографическую камеру.

3) Приготовление фильтровальной бумаги. Фильтровальную бумагу предварительно увлажняют фталатным буферным раствором и высушивают несколько дней на воздухе. Наилучшие результаты получают на бумаге Шляйхер-Шуль 2043 Ь.

Фиг. 60. Хроматография Разделение ДНФ-аминокислот в систе-^™,™AIЈ ме третичный амиловый спирт-фталат вый спирт—фталат. показано на фиг. 60.

4. ИДЕНТИФИКАЦИЯ ДНФ-АМИНОКИСЛОТ ТОНКОСЛОЙНОЙ

ХРОМАТОГРАФИЕЙ

Тонкослойная хроматография успешно применяется для идентификации ДНФ-аминокислот. По сравнению с хроматографией на бумаге этот метод более чувствителен и требует меньших затрат времени. Чаще всего смеси разделяют в силикагеле в следующих системах растворителей [21: а) толуол — пиридин — этиленхлор-гидрин—аммиак (0,8 М) (100 : 30 : 60 : 60); эта система гетероген-на, верхняя фаза используется для хроматографии, нижняя — для уравновешивания адсорбента; б) хлороформ—бензиловый

страница 110
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
взятьв аренду телефон
Рекомендуем компанию Ренесанс - лестницы - продажа, доставка, монтаж.
кресло ch 661
хранениеещей

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(10.12.2016)