химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

ридина и 100 мл уксусной кислоты разбавляют деионизованной водой до 1000 мл. Колебания рН буферного раствора под влиянием примесей не существенны для разделения.- Поскольку гидролизованные образцы растворяют в 0,01 н. НС1, гидролизат можно фракционировать на катионообменной пластинке. На анионообменной пластинке адсорбция цистеиновой кислоты минимальна, поскольку она обладает самым низким значением Rf.

Анализ большого числа проб производится следующим образом.

ОКИСЛЕНИЕ НАДМУРАВЬИНОЙ КИСЛОТОЙ '

50 мг растертого образца (семена, корм и т. д.) смешивают С 2 мл надмуравьиной кислоты и оставляют при комнатной темпера-, туре на 2 ч. Для приготовления надмуравьиной кислоты смешивают 1 объем перекиси водорода и 9 объемов муравьиной кислоты и инкубируют 30 мин при 4°С; в реакции используют свежеприготовленный раствор.

гидролиз ?

Окисленный образец гидролизу ют в течение 48 ч в S мл б н. НС1 при 105°С После гидролиза кислоту удаляют над КОН и

РАПОДГОТОВКА ХРОМАТОГРАФИИ

Хроматография может-быть выполнена двумя различными способами в зависимости от того, в каком источнике нужно определит цистеиновую кислоту: 1) в корме или 2) в определенном белке.

Фиг. 56, Определение цистеиновой кислоты в гидролизатах растительных

белков на пластинке «Фиксион 50 X 8».

В случае I) на пластинку наносят равные в расчете на сухо! вес исходного образца порции гидролиэатов. В случае 2) должно быть известно содержание азота в каждом образце и на основании этих данных наносят на пластинку порции гидролизатов, эшимолярные

по содержанию белка в исходных образцах. Например, если определяют содержание цистеиновой кислоты в образцах корма, целесообразно наносить гидролизаты полосками шириной в 1 см по 0,5 мг каждого образца в объеме 20 мкл. Если же определяют количество цистеиновой кислоты в образцах определенного белка, то гидролизаты разбавляют (после удаления кислоты) и из каждого наносят

на пластинку (полосками шириной в, 1 см) порции, содержащие одинаковое количество азота (0,1 мг белка в 20 мкл раствора).

ХРОМАТОГРАФИЯ

Хроматографию проводят в буферном растворе пиридин—уксусная кислота. Проявление ничем не отличается от методики, описанной для катионообменной пластинки. Типичная хроматограмма представлена на фиг. 56.

Цитированная литература

1. Devenyi Т., Single-column Procedure for the Automatic Analysis of Amino Acids, Acta Biochim. Biophys. Acad. Sci. Hung, 3, 429—432 (1968).

2. Devenyi Т., Modified Single-column Procedure for the Automatic Analysis of Amino Acids, Acta Biochim. Biophys. Acad. Sci. Hung, 4, 297 (1969).

3. Devenyi Т., Separation of Aromatic and Basic Amino Acids (Phenyl-ke-tonuri-test), Acta Biochim. Biophys. Acad. Sci. Hung, 5, 435 (1970).

4. Devenyi Т., Amino Acid Analyser Programming for the Rapid Determination of Methionine and Lysine, Acta Biochim. Biophys. Acad. Sci. Hung, 6, 129—132 (1971).

5. Devenyi Т., Bati J., Fabian F., Detection and Determination of Tryptophan, Acta Biochim. Biophys. Acad. Sci. Hung, 6, 133 (1971).

6. Devenyi Т., Hazai I., Ferenczi S., Bati J., One Dimensional Separation of Amino Acids, Acta Biochim. Biophys. Acad. Sci. Hung, 6, 385 (1971).

7. Devenyi Т., Bkti I., f(iss P., Kovdcs J.t Thin layer ion exchange chromatographic reining test for aminoacids in blood-samples dried on filter paper, Acta Biochim. Biophys. Acad. Sci. Hung, 7, 237 (1972).

8. Ferenczi S., Devenyi Т., Rapid estimation of cysteic acid, Acta Biochim. Biophys. Acad. Sci. Hung, 6, 329 (1971).

9. Ferenczi S.t Bati J., Devenyi Т., Testing of Methionine and Lysine in Plant Seeds, Acta Biochim. Biophys. Acad. Sci. Hung, 6, 123 (1971).

10. Hrabak A., Ferenczi 5., Determination of Ornithine in Biological Fluids, Acta Biochim. Biophys. Acad. Sci. Hung, 6, 383 (1971).

11. Kisfaludy L., Low M., Devenyi 7\, Enzymatic Degradation of Peptides Containing Alfa-aminooxy-carboxylic Acids, Acta Biochim. Biophys. Acad. Sci. Hung, 6, 393 (1971).

12. Sajgo M.j Devenyi Т., Rapid Determination of C-terminal Sequences on the Nanomole Scale, Acta Biochim. Biophys. Acad. Sci. Hung, 7, 233 (1972).

АНАЛИЗ КОНЦЕВЫХ ГРУПП И СТУПЕНЧАТАЯ ДЕГРАДАЦИЯ БЕЛКОВ И ПЕПТИДОВ

А. ОПРЕДЕЛЕНИЕ N-КОНЦЕВЫХ ГРУПП 2,4-ДИНИТРОФТОРБЕНЗОЛЬНЫМ МЕТОДОМ

После классической работы Сэнгера [17] 2,4-динитрофторбен-зольный метод стал одним из наиболее важных в белковой химии. Метод основан на следующих реакциях:

Kj R* Rj

N0»

NO2

HgN—CH— СО—NH—СН—CO-NH—CH—СОCH—CO—.

Ri Rj Rj

N0»

NH—CH—CO—NH— CH—CO—NH—С

R3

Ri Rs

I t

NH—CH—COOH + HjN—CH—COOH + HjN— С H— COOH

NOt

Реакции идут в слабощелочной среде: в присутствии NaHC03 2,4-динитрофторбензол (ДНФБ) связывается со свободными NH2-группами пептидной цепи. В результате гидролиза динитрофенили-рованного белка (ДНФ-белка) 20%-ной НС1, кроме свободных аминокислот, образуются ДНФ-аминокислоты, имеющие желтую окраску. ДНФ-аминокислоты, соответствующие N-концевому остатку белка (или пептида), имеют замену по а-углеродному атому.

Другие ДНФ-производные аминокисл

страница 108
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
твой дом крокус кухни
1с курсы обучение выхино
как установить камеру заднего вида
Buderus Logano G334 WS 146

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(09.12.2016)