химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

т в ампуле в 2 мл 2 н. NaOH, заполняют ампулу азотом и запаивают ее. Гидролиз проводят в течение 5 ч при 105' С После охлаждения добавляют 3 мл буферного раствора А и 1 мл концентрированной ПО.

ХРОМАТОГРАФИЯ

Для разделения используют буферный раствор Д (табл. 10), содержащий 10% метилцеллозшьва (третий буферный раствор одиаколоночной системы). Типичная хроматограмма показана на фиг. 55.

на

55

Фиг

so. Определение триптофана пластинке «Фиксион Г>0 X 8».

1 — ацетилтрнптофан: 2 — гидролизат глицилтрнп-тофаия; 3 — гидролизат пептида, не содержащего Три; 4 — гидролизат пептида, содержащего

Три.

При относительно высоком рН 161 и концентрации Na+ 1,5 М Три имеет самое низкое значение Rf. При хроматографии щелочного тадролмзата пептидов для получения четкой картины достаточно продвижения фронта растворителя на высоту 8—10 см. Если требуется количественно определить Три, можно прибегнуть к методике, разработанной для анализатора (экспресспрограмма):

Высота «голы в колонке , 14 см

Буферный раствор Д (табл. 10)

Скорость подачи буферного раствора 100 мл/ч

Скорость подачи нингидрина 50 мл/ч

Температура 55°С

Давление буферного раствора 8—12 атм

ОПРЕДЕЛЕНИЕ РАЦЕМИЗАЦИИ В ПЕПТИДНОМ СИНТЕЗЕ [3]

Иногда в пептидном синтезе требуется провести количественную оценку рацемизации, цроисходящей по мере протекания реакции. Это имеет особое значение в многоступенчатых сложных синтезах, когда превращение определенных промежуточных продуктов является критическим этапом образования конечного продукта. Для обнаружения рацемизации японскими авторами была разработана остроумная методика, которую можно широко использовать на различных стадиях пептидного синтеза. Ее суть заключается в следующем. В соответствующих условиях реакции в процессе синтеза происходит взаимодействие дипептида Гли-Ь-Ала с L-Лей. В оптимальном варианте продуктом реакции является исключительно Гли-Ь-Ала-Ь-Лей. Если же происходит рацемизация, то наряду с этим продуктом в реакционной смеси появится трипептид Гли-D-Ала-Ь-Лей. Для обнаружения и определения содержания этих двух трипептидов японские авторы использовали аминокислотный анализатор. Правда, разработанная ими методика не подходит для анализа большого количества проб, так как с учетом времени регенерации на исследование одного образца требуется примерно 3,5 ч.

На пластинке «Фиксион 50x8» изомеры-тр и пептиды Гли-L-Ала-Ь-Лей и Гли-О-Ала-Ь-Лей разделяются довольно хорошо. По интенсивности пятен разделенных пептидов можно оценить степень рацемизации препарата. Хроматографию проводят на уравновешенных пластинках в буферном растворе Е (табл. 10), т. е. во втором буферном растворе одноколоночной системы анализатора. Для получения оптимального разделения на пластинку наносят 10 мкл раствора образца в 0,01 н. НС1 (концентрация пептида 10 мг/мл). Хроматографируют при комнатной температуре До высоты 12—15 см. Если требуется количественно определить степень рацемизации (с точностью 5—10%), применяют денситомет-рию тонкослойных хроматограмм. Для получения более точных результатов целесообразно воспользоваться автоматическим анализатором.

АНИОНООБМЕННАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ НА ПЛАСТИНКЕ

«ФИКСИОН»

В принципе в качестве тонкого слоя может быть использована любая ионообменная смола. В настоящее время уже началось опытное производство анионообменных пластинок со смолой, близкой по своим свойствам к смоле дауэкс 2x8. Как и для катионообменных пластинок, в данном случае используется сверхтонкая сферическая смола в ацетатной форме.

С точки зрения техники анионообменная хроматография отлича-* ется от катионообменной лишь выбором буферных растворов.

Уравновешивание анионообменных пластинок производят 0,01 М уксусной кислотой в тех же условиях, в которых уравновешивают катионообменные пластинки.

БЫСТРОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЦИСТЕИНА И ЦИСТИНА В ФОРМЕ ЦИСТЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ В ОБРАЗЦАХ РАСТИТЕЛЬНОГО

ПРОИСХОЖДЕНИЯ [9]

С точки зрения питательной ценности кормов содержание цистина и Цис в веществах растительного происхождения имеет очень важное значение. Его можно определить прямым путем, но это требует огромных затрат труда, а полученные данные не позволяют рассчитать истинное содержание аминокислот, так как в условиях гидролиза они разлагаются. Обычно при количественном анализе цистина и Цис их предварительно окисляют надмуравьиной кислотой и'затем определяют в смеси устойчивую цистеиновую кислоту.

Количество цистеиновой кислоты в кислотном гидролизате пропорционально сумме количеств цистина и Цис в исходном образце. Цистеиновая кислота на катионообменной колонке и пластинке движется впереди всех остальных компонентов, так как она не связывается смолой. Благодаря своему сильно кислому характеру она хорошо связывается с анионообменной смолой, в результате чего ее движение значительно задерживается и она отделяется от остальных кислых компонентов (Асп, Глу). Хроматографию цистеиновой кислоты проводят в буферном растворе пиридин—уксусная кислота рН 3,8. Чтобы его приготовить, смесь 10 мл пи

страница 107
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
прокат звукового и светового оборудования
Рекомендуем компанию Ренесанс - заказать деревянные лестницы - продажа, доставка, монтаж.
стул для посетителей самба
Выгодное предложение от интернет-магазина KNSneva.ru на 2213-1217 - г. Санкт-Петербург, ул. Рузовская, д.11.

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(11.12.2016)