химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

блений переносят на пластинку «Фиксион 50 х 8», на которую наносят также и контрольную смесь. Хроматографию проводят в буферном растворе рН 3,3 при 45°С. На проявленной пластинке фактически представлена кинетика гидролиза. Материал, взятый в начале гидролиза (нулевая точка — углубление У), сравнивают с гидролизатами, взятыми через30 (углубление 2), 60 (углубление 3). 90 (углубление 4) и 120 мин (углубление 5). Практически этим микрометодом за 2 ч можно достоверно определить порядок-3—5 аминокислотных остатков в 8—10-членном пептиде. Условия эксперимента — соотношение фермента и субстрата, время инкубации, моменты отбора проб — можно варьировать в зависимости от природы субстрата, а также от цели анализа.

Количественные определения проводят способами, используемыми в обычной тонкослойной хроматографии. Хроматограммы на пластинках «Фиксион» денситометрируют точно так же, как и в случае других носителей (целлюлоза, силикагель). Если по какой-то причине (отсутствие приборов, нестабильность цветной реакции и т. п.) это неосуществимо, тогда соответствующие зоны можно элюировать. В связи с тем, что катионообменная смола обладает большой сорбцией, необходимо обращать внимание на то, чтобы элюирующий раствор имел рН 6 или выше. Если полуколичественные методы, применяемые в обычной тонкослойной хроматографии, дают неудовлетворительные результаты, нужно воспользоваться аналогичным количественным методом с использованием анализатора. Для определения полного аминокислотного состава целесообразно применять одноколоночный двухбуферный [1] или трех-буферный [2] метод (см. гл. VI).

ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ МЕТИОНИНА И ЛИЗИНА В ОБРАЗЦАХ РАСТИТЕЛЬНОГО И ЖИВОТНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ [8[

В работах по селекции растений и оценке кормов знание количества Лиз и Мет особенно важно. Совсем не обязательно при этом проводить количественный анализ огромного числа образцов. Пред^ варительный отбор на основе приближенных данных дает вполне достаточную информацию о том, в каких именно образцах следует провести полный количественный анализ.

Для определения Мет в природных веществах можно использовать гидролизаты, полученные описанным выше методом. Они, как правило, содержат значительно большие количества Лиз, чем Мет. В связи с этим в образце с низким содержанием Мет довольно трудно на одной пластинке провести количественное определение этих двух аминокислот. Целесообразно проводить анализ Лиз и Мет в одном гидролизате на двух пластинках.

Гидролиз проводят по ранее описанному методу. Не удаляя кис-, лоты, 20 мкл гидролизата в виде полосы шириной 1 см (если проба содержит 8 мг азота в 2 мл 6 н. НС1) наносят на уравновешенную пластинку «Фиксион 50 х 8» и подсушивают феном. Хроматографию проводят в буферном растворе А (табл. 10), который является первым буферным раствором анализатора, но дополнительно содержит 10% глицерина. Рекомендуется хроматографировать при 45°С и дать возможность фронту раствора подняться до верхнего края пластинки. Если содержание Мет в образце очень мало, то пластинку следует постепенно погружать в растворитель все глубже и проводить проточную хроматографию с помощью фильтровальной бумаги, как это делается при уравновешивании. При этом компоненты с высокими улюируются с пластинки, что облегчает отделение Мет от Вал, Лей и Иле, которых, вероятно, значительно больше в смеси, чем Мег. Хроматограмму проявляют кадмий-нишидрипом при 45СС или при комнатной температуре. Картина хрома-то г р афич ее ког о р аз д с л ен ия представлена на фиг. о4.

Для количественной оценки применяют любой из способов обычной тонкослойной хроматографии: денситомет-рию, элюирование и, т. п. Если требуется определить содержание Лиз и Мет очень точно, можю использовать короткие экспресспрограммы аминокислотного анализатора [31 (см. гл. VI).

Фиг. 54. Определение метионина в гидролизатах растительных белков.

I — вида» содержание Мет; 2,3 — среднее содержание Мет; 4 —высокое содержание Мет.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ТРИПТОФАНА В ЩЕЛОЧНОМ ГИДРОЛИЗАТЕ [Г,]

В кислотном гидролизате Три определить нельзя, так как при этом он полностью разлагается. В принципе существуют 2 методики определения Три: специфическая качественная цветная реакция в щелочном гидролизате и спект рофотометрия Три в исходном растворе. "Обе методики имеют свои недостатки: цветная реакция в щелочном гидролизате не строго специфична, так как гидролизах содержит много примесей, а с.пектрофотометрическнй способ применим только тогда, когда вещество полностью растворяется, образуя прозрачный раствор, или смесь не содержит компонентов (например, коферментов), поглощающих при данной длине волны. Методы классической хроматографии в тонком слое или на бумаге не позволяют достоверно определить Три из-за высокой концентрации солей в

нейтрализованном гидролизат При тонкослойной ионообменной хроматографии удается преодолеть это затруднение,- так как высокое шдержаиие соли не мешает разделению.

ГИДРОЛИЗ

Гидролиз проводят следующим образом: примерно 5 мг пептида или белка растворяю

страница 106
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
обучение холодильщика в миассе
спектакль я была в доме и ждала
kw 5640-4d
пожарный клапан 600*600 купить

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(24.11.2017)