химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

. При сравнении исследуемых образцов с контролем можно все образцы разделить на 3 типа, в которых содержание Лиз будет низким, средним и высоким. На основе этих данных отбирают те пробы, для которых можно провести количественный анализ. Поскольку содержание всех остальных аминокислот по сравнению с содержанием Лиз овольно велико, рекомендуется х р о м атог р афир о в ать пробы по крайней мере до тех пор, пока фронт буферного раствора не поднимется на высоту 17—18 см. Таким же способом можно определить в образцах содержание Мет. Типичная картина разделения Показана на фиг. 50.

РАЗДЕЛЕНИЕ АРОМАТИЧЕСКИХ И ОСНОВНЫХ АМИНОКИСЛОТ

В КЛИНИЧЕСКОЙ ПРАКТИКЕ

Метод применим для раннего выявления нарушений аминокислотного метаболизма у новорожденных. Эти наследственные дефекты обмена проявляются в накоплении в крови и моче определенных аминокислот. Среди заболеваний» связанных с обменом аминокислот, самым распространенным является фенилкегонурия, при которой в крови накапливается Фен. Кроме того, известны заболевания, характеризующиеся накоплением Лиз, Гис, Тир, а также другими, менее специфическими нарушениями. Так, например, для цистину-рии характерно не только повышение количества цистина, но и накопление гомоцистина.

Одно из достоинств тонкослойной ионообменной хроматографии состоит в том, что она является простым и доступным методом раннего обнаружения почти всех наследственных дефектов обмена аминокислот. Нами разработаны две методики для массовых испытаний.

ХРОМАТОГРАФИЯ АРОМАТИЧЕСКИХ И ОСНОВНЫХ АМИНОКИСЛОТ ГЕПАРИНЦЗИРОВАННОЯ КРОВИ [3]

50 мил крови, взятой с гепарином, внося) в маленькую пробирку и добавляют V3 объема тр ихлоруксусной кислоты (ТХУ). После

К '1 ' « MS. JIT

Фиг. 51. Хромятограмма надосадочной жидкости плазмы кропи после обработки трихлоруксуспой кислотой.

К — контрольная смесь аминокислот (с последовательно возрастающими /? ^) Apr, Гис.

Лиа, Фен, Тир, Лей. 1. 2 —пробы из плазмы больного фенилкетонурией; 3, 4, § — ПРОБЫ

из плазмы здорового че"опека.

ч

центрифугирования 20 мкл надосадочной жидкости наносят на пластинку «Фиксион 50 х 8» и дважды хроматографируют вместе с контрольной смесью, нанесенной по обе стороны от опытной пробы.; Для удаления ТХУ сначала хроматографируют в 0,01 п. ПО до тех пор, пока фронт буферного раствора не пройдет 18 см. На пластинке с сильным катионообменником ТХУ не связывается и движется вместе, с фронтом растворителя, тогда как большинство аминокислот, в первую очередь ароматические и основные, связывается. Пластинку высушивают феном и затем подвергают хроматографии в буферном растворе цитрата натрия рП 5,23 (буфер В, табл. 10). Типичная хроматограмма представлена па фиг. 51.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ СВОБОДНЫХ АМИНОКИСЛОТ В ПРОБЕ ЩРОВИ»

ВЫСУШЕННОЙ НА ФИЛЬТРОВАЛЬНОЙ БУМАГЕ т

Одну каплю крови (примерно 50 мкл) наносят на тонкую фильтровальную бумагу и дают ей высохнуть при комнатной температуре*

Фиг. W2. Исследование образной крови, высушенных на фильтровальной бумаге, при диагностике фен и л к стону рНН.

Ж—контрольная смесь аминокислот Apr,

Гис. Лиз, Феи,- Тир, Лей, крон»

бодтнйго феннлнетонурней; у, $, j —кровь адорового человека.

диаметр пятна крови должен быть около 15 мм. С помощью пробойника вырезают из пятна 5—6 дисков диаметром около 5 мм и помещают их в вассер-мановскую пробирку, куда затем наливают 0,1 мл раствора 0,1 н. НО в 95%-ном этаноле. Пробирки закрывают парафиль-мом и оставляют на ночь при комнатной температуре. На следующий день образцы наносят на пластинки «Фиксион 50 х 8» по 10—15 мкл в одну точку. Благодаря присутствию в растворе спирта с помощью фена удается наносить образцы довольно быстро. После нанесения проводят хроматографию в цитратном (или каком-либо другом) буферном растворе рН 5,23. Типичная картина такого фракционирования показана на фиг. 52.

Этот способ очень .удобен для анализа проб крови: кровь, взятую из пальца или из пятки, после непшредственного нанесения на фильтровальную

бумагу можно отправлять по почте. Кислотноспиртовое элюирование в.данном случае позволяет^обойтись без предварительного удаления белковых веществ» а также повторной хроматографии. При более низком значении рН и более высокой концентрации На* основные компоненты' разделяются на-большее число фракций: Орн» например,» можно отделить от Лиз [101. Для этой цели применяют буферный раствор Г (табл. 10) с концентрацией Na+ 0,4 М и рН 4,25.'

одномерное разделение аминокислот Щ

С помощью тонкослойной ионообменной хроматографии можно разделить 16 аминокислот, присутствующих в белковом гидролизате, используя всего лишь один буферный раствор. В буферном растворе Б (табл. 10), имеющем относительно высокую концентрацию ионов цитрата, смесь из 16 аминокислот делится на 15 компонентов. Картина такого разделения показана на фиг. 53, Из 16 аминокислот не разделяются только Тре и Сер,

Около 0,5 мкг исследуемого и контрольного (смесь аминокислот или отдельные аминокислоты) материала наносят ц виде точки на уравновешенную

страница 104
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
облицовочный кирпич для фасада цена
сайт по сбору денег на лечение
билет на концерт кипелова 27 октября
основание аскона 200*160

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(19.09.2017)