химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

количественная оценка хроматограммы, надо выбрать один из двух следующих способов проявления:

2. Хроматограмму высушивают и опрыскивают, как описано в п. 1. После этого ацетон испаряют в потоке холодного воздуха, затем слой покрывают* чистой и сухой стеклянной пластинкой и помещают в воздушный термостат при 45°С на 30 мин.

3. Когда проявляют при комнатной температуре, высушивание, проявление и испарение ацетона производят так же, как описано в п. 2. Накрытую стеклом хроматографическую пластинку оставляют на 8—16 ч в темном месте (в ящике или коробке). Чем ниже температура проявления, тем меньше окрасится фон; это имеет большое значение при количественном анализе, а также в тех случаях, когда количество исследуемого материала особенно мало (0,05—0,1 мкг).

Фон в первую очередь может окрашиваться в результате адсорбции паров аммиака, поэтому пластинки нельзя держать в атмосфере, загрязненной аммиаком и табачным дымом. Слой ионообменника занимает большую поверхность и может связывать аммиак даже из воздуха. Крайне важно для хроматографии применение свежеприготовленных растворов: при бактериальном проросте в

них может образоваться значительное количество аммиака, который загрязнит слой при уравновешивании и последующем разделении.* Хранение проявленных хроматограмм ничем не отличается от хранения обычных «классических» слоев (силикагель, целлюлоза). Готовую хроматограмму накрывают стеклянной пластинкой, обматывают обе пластинки склеивающей лентой и хранят несколько месяцев. С помощью копирующего аппарата хроматограммы можно непосредственно копировать для документации в размере оригинала.

ОБЛАСТИ ПРИМЕНЕНИЯ

РАЗДЕЛЕНИЕ АРОМАТИЧЕСКИХ И ОСНОВНЫХ АМИНОКИСЛОТ [3]

Ароматические и основные аминокислоты на пластинке «Фиксион. 50 х 8» разделяются при одномерной хроматографии в цитратом буферном растворе рН 5,23 с концентрацией Na+ 0,35 М

(буферный раствор В, табл. 10), который используется в двухколоночной системе аминокислотного анализатора. Типичная хроматография такого разделения представлена на фиг. 49. Колебания рН и концентрации буферного раствора не существенны для

фракционирования. Хроматографию проводят при комнатной температуре без предварительного уравновешивания. В камеру наливают слой буферного раствора высотой примерно 1 см. При хроматографии фронт буферного раствора должен подняться на

высоту 15 см. Если пластинка не уравновешена, на это

уходит около 2 ч. На уравновешенной пластинке (см.

буферный раствор для уравновешивания, табл. 10) это

происходит за несколько минут. На примере разделения

ароматических и основных

аминокислот можно оценить

высокую разрешающую способность ионообменной хроматографии в тонком слое по

сравнению с соответствующей

колоночной техникой. Известно, что на малой колонке

в этом же буферном растворе

~ АП п (т. е. 0,35 М Na+, рН 5,23)

Фиг. 40. Разделение основных и про- 1 *

матическид .аминокислот на пластинке ароматические аминокислоты

vФиксион Г)0х8*. не отделяются друг от друга.

Хорошее разделение можно получить при хроматографии в летучем буферном растворе пиридин — уксусная кислота рН 5, который готовят на деионизованной воде, смешивая 40 мл уксусной кислоты и 40 мл пиридина и доводя конечный объем до 1000 мл. В этом буферном растворе в отличие от нитратного Тир и Фен меняются местами (фиг. 50), а аминокислоты в направлении от линии старта к фронту растворителя движутся в следующем порядке: Apr, Гис, Лиз, Тир, Фен.

В исследованиях, проводимых в сельском хозяйстве и клинической практике, разделение основных и ароматических аминокислот имеет большое значение.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ЛИЗИНА ПРИ ПРОВЕДЕНИИ [МАССОВЫХ АНАЛИЗОВ В СЕЛЬСКОМ ХОЗЯЙСТВЕ

Определение Лиз необходимо, например при селекции растений, при оценке кормов и т. п. Принцип работы с большим числом проб заключается в следующем [8].

Исследуемые образцы (например, зерна) гидролизуют в течение 40 ч при 105°С в атмосфере азота в б н. НС1. Из каждой пробы отбирают порции с одинаковым содержанием азота. Наш опыт показывает, что наилучшие результаты получаются с пробами, содержащими примерно 8—10 мг азота, однако это зависит также от сред^

него содержания Лиз (или другой аминокислоты, например Мет) в данной пробе. Эквимолярные по азоту порции из каждой пробы наносят непосредственно на пластинку в виде, полосы. Если проба содержит, например, 8 мг азота, то при среднем содержании

Лиз для удовлетворительной оценки пятен оптимально наносить в одпос антиметровую полосу 10 мкл рас шора.

Фиг. 50. Определение лили на в гидролизата х расти тел !>ш-дх белков на пластинке «Фиксион 50X8».

После напесешш /голос гидролизатов лар аллельно наносят контрольные смеси. Для лучшей идентификации целесообразно наносить па пластинку несколько проб с известным содержанием Лиз. Например, если среднее количество Лиз в 1-сантиметровой полосе 0,5 мкг (исходя из навески и количества нанесенного .образца), следует наносить па пластинку 0,25, 0,5 и 0,75 мкг Лиз

страница 103
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
балет на льду москва
кухонные столы магазины в москве
промышленый стул
сосудистая импотенция операция стоимость

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(12.12.2017)