химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

целесообразно снимать с пластинки эту полоску слоя ионообменника.

Уравновешенные пластинки можно неограниченно долго хранить при комнатной температуре. Надо только следить за тем, чтобы они не адсорбировали пары аммиака. Чтобы исключить эту возможность, следует в частности запретить в лаборатории курение.

НАНЕСЕНИЕ ПРОБ

В классическом методе тонкослойной хроматографии перед нанесением на пластинку исследуемый материал необходимо обессолить. Обессоливание требует больших затрат труда и времени, а при малом количестве вещества приводит к значительным потерям. При ионообменной тонкослойной хроматографии соль, нанесенная вместе с образцом, не мешает процессу разделения, так как концентрация элюирующего буферного раствора, как правило, превышает концентрацию солей в образце. Чтобы получить полное разделение фракций, необходимо выполнять следующие требования:

1. рН исследуемого образца должен быть ниже 3, целесообразно доводить его до 2. Если образец находится в сухом виде (например, высушенный гидролизат или экстракт), то, рекомендуется растворять его в 0,01 н. HCl.

2. Если исследуемый материал наносят в виде точки, ее диаметр не должен быть больше 2—3 мм, а если в виде полосы, то ширина ее не должна быть больше 1 см.

3. Образец наносят на пластинку с помощью тонкого капилляра. После каждого нанесения капли на пластинку место нанесения нужно подсушить, чтобы предотвратить повреждение слоя.

4. Чем выше концентрация наносимого образца, тем быстрее и удобнее проводить исследование. Максимально на пластинку следует наносить 1—2 мкг смеси аминокислот. При разделении смеси аминокислот с близкими значениями Rf для получения воспроизводимых результатов допустима 4—5-кратная разница в их концентрациях. Когда Rf аминокислот сильно различаются, это, конечно, не имеет значения.

5. Гидролизаты, если это необходимо (например, для определения Мет), можно непосредственно наносить на пластинку. В теплом потоке воздуха кислота мгновенно испаряется и Мет не успевает разложиться.

6. Щелочные гидролизаты, например при определении Три, наносят после нейтрализации или подкисления; образующаяся при этом соль не мешает хроматографии.

7. Если исследуемый материал растворяется в этаноле в присутствии кислоты, его суспендируют в растворе 0,1 н. НС1 в 95%-ном этаноле, который осаждает следы белков, мешающих разделению. Для физиологических жидкостей (кровь, плазма и т. д.) такая обработка наносимого материала имеет большое значение.

8. Во всех до сих пор разработанных методиках ионообменной тонкослойной хроматографии ограничиваются одномерным разделением. Это одно из преимуществ данного метода по сравнению с классическими методами тонкослойной хроматографии. Для получения однозначной и простой для оценки картины следует в двух местах пластинки (в виде точки или полосы) нанести соответствующие контрольные смеси. Это очень облегчает идентификацию, а если по какой-то причине хроматографическая картина отличается от ожидаемой, тогда с помощью контрольной смеси можно выяснить причину неполного разделения и определить состав образца;

ПРИГОТОВЛЕНИЕ РАСТВОРА НИНГИДРИНА

Для общего анализа аминокислот применяют 2 типа раствора нингидрина — кадмиевый и коллидиновый.

ПРИГОТОВЛЕНИЕ КАДМИЙ-НИНГИДРИНОВОГО РЕАГЕНТА

Раствор 1. 1 г нингидрина растворяют в 100 мл ацетона и раствор хранят в темной склянке на холоду.

Раствор 2. 1Т ацетата кадмия растворяют в смеси 50 мл ледяной уксусной кислоты и 100 мл дистиллированной воды.

ПРОЯВЛЕНИЕ

Для получения проявителя смешивают 100 мл раствора 1 и 20 мл раствора 2. Кадмий-нингидриновый реагент дает стабильную красную окраску со всеми аминокислотами (кроме Про, который в первые минуты проявления желтеет, а через несколько минут обесцвечивается). При одномерном разделении 16 аминокислот для достоверного отличия Гли от Ала, имеющих близкие значения R*, целесообразно применять коллидиновый раствор нингидрина, так как при этом разные аминокислоты окрашиваются в разный цвет; Асп, например, окрашивается в голубой цвет, Гли и Тир — в бурый, а большинство аминокислот — в пурпурный.

ПРИГОТОВЛЕНИЕ КОЛЛИДИН-НИНГИДРИНОВОГО РЕАГЕНТА

Раствор 1. 1 г нингидрина растворяют в смеси 100 мл ацетона и 10 мл ледяной уксусной кислоты.

Раствор 2. 1 г ацетата кадмия растворяют в 100 мл 50%-ного раствора уксусной кислоты.

Раствор 3. Коллидин.

ПРОЯВЛЕНИЕ

Для получения проявителя смешивают 10 мл раствора 1, 1 мл раствора 2 и 1 мл раствора 3. Проявлять пластинки можно тремя способами.

1. При быстрой идентификации и качественной оценке хорошо

высушенную в потоке теплого воздуха пластинку осторожно и

равномерно опрыскивают выбранным нингидриновым реагентом.

После опрыскивания слой высушивают феном. В течение 2—3 мин

развивается окрашивание и проявляются пятна.

Примечание. Этот способ не применим для денситометрической полуколичественной или количественной оценки, так как в результате локальных перегревов некоторые участки на пластинке «перепроявляются». Если требуется полуколичественная или

страница 102
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
купить букет не дорогой для невесты
Фирма Ренессанс лестница готовая - качественно, оперативно, надежно!
стул кресло престиж
складовка . ру

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(11.12.2016)