химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

ы: в данном случае — это смола дауэкс 50 х 8 в Ыа+-форме, специально полученная для тонкослойной хроматографии.

ПРИМЕНЕНИЕ ПЛАСТИНОК «ФИКСИОН 50 X 8»

F При использовании пластинок «Фиксион 50 х 8» надо иметь в^виду следующее;

Ионообменная хроматография в'гонком слое

24Ь

А. В проводимых исследованиях, например при разделении аминокислот, необходимо обеспечить условия (буферный раствор, молярность, рН, температура), близкие к тем, которые применяются при хроматографии на колонке, так как функциональным компонентом, слоя является тот же материал, который используется для колоночной хроматографии, т. е. сильный катионообменник.

Б. При хроматографии, высушивании, нанесении пробы, проявлении, оценке разделения, документации и т. д. можно применять ранее разработанные хорошо известные способы тонкослойной хроматографии. Например, для разделения основных аминокислот в аминокислотном анализаторе применяют буфер, имеющий концентрацию Na+ 0,35 М и рН 5,23; этот же буфер пригоден для разделения основных аминокислот на пластинке «Фиксион 50 х 8». При этом, кроме основных, хорошо разделяются и идентифицируются ароматические аминокислоты Тир и Фен.

При разделении основных и ароматических аминокислот операции проводят в следующей последовательности:

1. На пластинке мягким карандашом отмечают линию старта (примерно на расстоянии 1,5 см от нижнего края).

2. Исследуемый образец наносят капилляром. Если необходимо нанести довольно большой объем разбавленного раствора, применяют подсушивание феном.

3. Пластинку помещают в герметичную хроматографическую камеру, на дне которой находится слой буферного раствора высотой 1 см.

4. Хроматографию проводят при комнатной температуре до тех пор, пока фронт буферного раствора не поднимется-на высоту 15 см.

5. Пластинку извлекают из камеры и высушивают феном.

6. Пластинку опрыскивают -раствором нингидрина в ацетоне

и высушивают феном. Нагревание пластинки в течение нескольких

минут способствует появлению пятен.

В некоторых случаях (например, при разделении смеси 16 аминокислот) пластинку «Фиксион» перед использованием необходимо уравновесить буферным раствором. При уравновешивании, как и при колоночной хроматографии, создается соответствующая ионная среда и удаляются возможные примеси, находящиеся в слое. Буферные растворы следует готовить на деионизованной воде.

В хроматографическую камеру стандартных размеров заливают 100 мл буферного раствора; при этом слой жидкости на дне должен иметь высоту 1—1,5 см. Такого количества буферного раствора достаточно для проведения хроматографии на 3 пластинках. В одну камеру одновременно можно поставить 2—3 пластинки.

УРАВНОВЕШИВАНИЕ ПЛАСТИНОК «ФИКСИОН 50 X 8»

Для ионообменной хроматографии используется смола в соот % ветствующей ионной форме. При колоночной хроматографии смолУ: сначала переводят из одной формы в другую (например, из Н+- в Ыа+-форму), а потом колонку уравновешивают стартовым буферным раствором. При работе с пластинками «Фиксион 50 х 8» первой стадии, т.е .перевода из одной формы в другую, не требуется, так

как слой готовят из особо чистой смолы, которая уже находится в Ыа+-форме. Однако в некоторых случаях уравновешивание смолы необходимо, особенно при разработке новых методов. Оно осуществляется довольно просто — проточной хроматографией при непрерывной подаче буферного раствора. Пластинку «Фиксион 50 х 8» накладывают обратной стороной на стекло такого же размера. Складывают 4 листа фильтровальной бумаги (размером 20 х X 15 см), с одного конца загибая полоску шириной 1 см, и прикладывают их к верхнему краю пластинки так, чтобы загнутая односантиметровая полоска бумаги покрыла слой ионнообменника; ее прикрепляют к пластинке резиновой обхваткой подходящего размера или двумя стеклянными палочками длиной 21 см, крепко связанными на концах (фиг. 48). Свободную часть листов бумаги отгибают на обратную сторону стекла. Листы бумаг должны быть шире пластинки, иначе при закреплении они могут собраться в складки, в результате неплотного прилегания нарушится равномерное поступление буферного раствора и процесс уравновешивания будет проходить плохо.

Для уравновешивания следует применять очень разбавленный буферный раствор, молярность которого на порядок ниже буферного раствора для хроматографии. Не рекомендуется применять буферный раствор с рН ниже 3, потому что при продолжительной хроматографии (16—24 ч) в таких условиях слой ионообменника может адсорбировать ионы тяжелых металлов, и тогда уравновешивание принесет больше вреда, чем пользы.

При уравновешивании обычно применяют нитратный буферный раствор, имеющий концентрацию Na+ 0,02 М и рН 3, используемый в 10-кратном-разведении в качестве первого буферного раствора (А) в аминокислотном анализаторе. Во время уравновешивания пластинки нижняя часть слоя (погружаемая в буферный раствор) может расслоиться, сползти с подложки или полностью отделиться от нее. Поэтому при уравновешивании следует погружать конец пластинки не более чем на 1 см, а после высушивания

страница 101
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
asics gel pursuit 2 цена
установка сигнализации
курсы парикмахер модельер стилист москва
курсы косметологов в москве модели

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(05.12.2016)