химический каталог




Аминокислоты, пептиды и белки

Автор Т.Дэвени, Я.Гергей

ов IgG высокой иммунохимической чистоты из нативной сыворотки. Его можно комбинировать с другими способами очистки, например с осаждением риванолом, Na2S04 и т. п. Подобным образом в качестве одного из этапов препаративного выделения анио-нообменная хроматография может применяться для очистки других белков сыворотки. При изучении структуры белка ее можно использовать для выделения и очистки полипептидов после расщепления белка ферментами или какими-либо другими веществами.

Для решения тех же задач и в тех же областях исследования можно применять катионообменную хроматографию, в которой чаще всего используют фосфоцеллюлозу, карбоксиметилцеллюлозу и кар бо ксимети л - сефадекс.

5. ФРАКЦИОНИРОВАНИЕ БЕЛКОВ С ПОМОЩЬЮ ГЕЛЬ-ФИЛЬТРАЦИИ

Разработанная Поратом и Флодиным в 1959 г. [15] гель-фильтрация явилась большим достижением в развитии фракционирования белков по молекулярному весу. Материал, используемый в этом методе в качестве неподвижной фазы, носит фирменное название сефадекс и представляет собой нерастворимый в воде высокогидрофильный декстран с поперечными сшивками, имеющий пористую структуру. Благодаря многочисленным гидрофильным группам он способен разбухать в воде и водных растворах солей, образуя гель, который может выполнять роль молекулярного сита при разделении веществ разного молекулярного веса. Размер пор этого сита определяется частотой поперечных сшивок в декстране. Чем ближе друг к другу расположены поперечные сшивки, тем плотнее пространственный каркас геля и соответственно меньше способность сефадекса связывать воду.

Если раствор, содержащий вещества различного молекулярного веса, пропустить через колонку, заполненную гелем сефадекса, то более мелкие молекулы проникнут во внутреннюю часть гель-образующих гранул и в результате их миграция через колонку будет замедлена. В то же время вещества большего молекулярного веса не проникают внутрь гранул геля и мигрируют быстрее мелких молекул. Разные скорости миграции приводят к разделению веществ при их прохождении через «молекулярные сита».

Фирма Pharmacia (Швеция) выпускает 18 типов сефадексов (без ионообменных свойств), которые отличаются друг от друга частотой поперечных сшивок. Важнейшие свойства сефадексов приведены в табл. 2. Символ, указывающий тип сефадекса (G-25, G-50 и т. д.), обозначает пористую структуру (G) и величину поглощения воды на грамм сухого веса сефадекса, т. е. указывает частоту поперечных сшивок декстрана. У сефадексов с высоким значением индекса цифра указывает нижний предел молекулярного веса веществ (в тысячах), не проникающих внутрь гранул геля. Например, вещества с молекулярным весом меньше \00 ООО могут проникать внутрь гранул сефадекса G-100, тогда как вещества с более крупными молекулами выходят в свободном объеме раствора.

Благодаря перечисленным выше свойствам сефадексы интенсивно используются при изучении структуры белков. Чаще всего их применяют для разделения белков в зависимости от молекулярного веса, для очистки белковых фракций, для концентрирования разбавленных растворов белка и для обессоливания белковых препаратов.

Гель-фильтрация все шире используется для фракционирования белков сыворотки. Наиболее подходящим в данном случае является сефадекс G-200. С колонки этого геля белки сыворотки элюи-руются тремя пиками. Первый пик соответствует в основном липо-протеидам и макроглобулинам, вторым пиком выходит IgG, в третьем пике содержатся главным образом альбумин и трансферрин. В принципе гель-фильтрацию на G-200 можно использовать и для выделения иммуноглобулинов.

С 1962 г. в хроматографии стали применять полиакриламидные

гели [5,8]. Фирма Bio-Rad Laboratories выпускает более 30 гелей для хроматографии под коммерческим названием биогели (табл. 3). Сухие биогели, подобно сефадексам, набухают в воде и имеют такие же свойства в диапазоне рН от 2 до 11. Первое сообщение о гель-хроматографии в агаре в 1961 г. сделал Полсон [14]. Главной особенностью гелей агара и агарозы является пригодность для фракционирования веществ с большим молекулярным весом, которые не удается разделить на сефадексе G-200 или биогеле Р-300.

Агар и агароза при нагревании становятся жидкими. В связи с этим их гели при температуре выше 50° С теряют стабильность. Их нельзя использовать при рН ниже 4,5 и выше 9,0; поэтому при работе с этими гелями крайне важно соблюдать указания изготовителя относительно температуры и величины рН. В продаже имеются следующие гели агарозы: сагавак (фирма Seravac Laboratories, сефароза (фирма Pharmacia Fine Chemicals), гелароза (фирма Litex) и биогель А (фирма Bio-Rad Laboratories).

Тип биогеля

А

Я

а

К X

4) .

ass

ЕМ

Область разделения по мол. весу

2 2-5. ОЭа

П

III

А

и а и

Для тонкослойной хроматографии

5,7 5.7

14,8 14,8

Биогель Р-2 50—100 2 600

» Р-2 100—200 2 600

» Р-2 200—400 2 600

» Р-2 —400 2 600

» Р-4 50—100 3 600

» Р-4 100—200 3 600

» Р-4 200—400 3 600

» Р-4 —400 3 600

Р-6 50—100 4 600

» Р-6 100—200 4 600

» Р-6 200—400 4 600

Р-

страница 10
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148

Скачать книгу "Аминокислоты, пептиды и белки" (2.92Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
Интернет-магазин КНС Нева предлагает Brother HL-L5100DN - 10 лет надежной работы! Санкт Петербург, ул. Рузовская, д.11.
билеты на мельницу
Jacques Lemans Classic 1-1902E
таблички-ответственный за пожарную безопасность

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(24.02.2017)