химический каталог




Практическая химия белка

Автор А.Дарбре

одификация остатков аргинина....... 145

3.4.5. Модификация карбоксильных групп белка..... 146

3.5. Протеазы с высокой специфичностью....... 146

3.5.1. Трипсин.............. 147

3.5.2. Тромбин.............. 149

3.5.3. Протеаза V8 из Staphylococcus aureus...... 150

3.5.4. Клострипаин............. \$[

3.5.5. Протеаза подчелюстной железы........ 153

614 ОГЛАВЛЕНИЕ

3.5.6. Протеаза из Armillaria mellea........ 153

3.5.7. Протеаза II из Myxobacier AL1........ 154

3.5.8. Постпролинспецифичный фермент....... 155

3.6. Протеазы с низкой специфичностью........ 156

3.6.1. Химотрипсин............. 156

3.6.2. Термолизин............. 157

3.6.3. Пепсин............... 158

3.6.4. Папаин.............. Lri8

3.6.5. Эластаза.............. 159

3.6.6. ct-Протеаза из Crotalus atrox........ 139

3.6.7. а-Литическая протеаза из Sorangium sp...... 160

3.7. Заключение.............. 160

Литература............... 160

Глава 4. Дисульфидные связи............ 165

4.1. Введение............... 165

4.2. Принципиальная схема анализа......... 166

4.3. Определение числа дисульфидных связей...... 168

4.4. Расщепление полипептидной цепи до коротких цистинсодержащих пептидов.............. 169

4.4.1. Расщепление бромоцианом......... 170

4.4.2. Гидролиз пепсином........... 170

4.4.3. Гидролиз трипсином и химотрипсином...... I/O

4.4.4. Гидролиз стафилококковой протеазой...... 171

4.4.5. Гидролиз термолизином.......... 171

4.4.6. Гидролиз после малеилирования и сукцинилирования . . 172

4.5. Фракционирование цистинсодержащих пептидов . . . . 173

4.5.1. Методы фракционирования......... 173

4.5.2. Обнаружение цистинсодержащих пептидов..... 173

4.6. Идентификация и локализация цистинсодержащих пептидов 174

4.6.1. Расщепление дисульфидных связей....... 174

4.6.2. Идентификация по известной аминокислотной последовательности .............. 174

4.6.3. Идентификация дисульфидных связей у белков с неизвестной аминокислотной последовательностью..... 176

4.6.4. Общие замечания............ 176

4.7. Специальные методы............ 176

4.7.1. Красители.............. 176

4.7.2. Диагональное картирование . . ...... 176

4.7.3. Специфическое расщепление по остаткам цистеина . . 177 Литература............... 178

Глава 5. Аффинная хроматография белков........ 180

5Л. Введение............... 180

5.2. Область применения аффинной хроматографии..... 180

5.3. Методы приготовления аффинного сорбента..... 181

5.3.1. Понятие об аффинном сорбенте........ 181

5.3.2. Материалы-носители........... 182

5.3.3. Пространственные группы......... 184

5.3.4. Лиганд............... 184

5.3.5. Конденсация............. 185

5.4. Адсорбция и элюирование.......... 185

5.5. Общие приемы аффинной хроматографии..... 187

5.5.1. Иммобилизованные лектины......... 187

5.5.2. Иммобилизованные антитела......... 187

5.5.3. Иммобилизованные субстраты, ингибиторы и кофакторы ферментов.............. 189

ОГЛАВЛЕНИЕ 615

5.6. Примеры............... 190

5.6.1. Выделение и очистка антител........ 190

5.6.2. Очистка рецепторов гормонов........ 192

5.7. Стратегия очистки редких белков........ 195

Литература............... 195

Глава 6. Разделение смесей белков и пептидов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии........ 197

6.1. Введение............... 197

6.2. Гель-хроматография............ 198

6.2.1. Параметры разделения.......... 199

6.2.2. Химические факторы........... 201

6.2.3. Определение истинных молекулярных масс..... -58^—

6.3. Адсорбция и распределение полипептидов и белков . . . ЗЮ7

6.3.1. Подготовка к нанесению образца....... 213

6.3.2. Выбор колонки для обращенно-фазового разделения . . 214

6.3.3. Подвижная фаза............ 214

6.4. Обращенно-фазовое разделение пептидов...... 214

6.4.1. Выбор состава подвижной фазы........ 215

6.4.2. Выделение пептидов с использование фосфорной кислоты 217

6.4.3. Разделение пептидов с использованием трифтороуксусной и гептафторомасляной кислот......... 217

6.4.4. Корреляция между удерживанием и структурой . . . 217

6.5. Скоростная жидкостная хроматография белков..... 220

6.6. Ионный обмен.............. 221

Литература............... 222

Глаав 7. Пептидное картирование белков ........ 223

7.1. Введение............... 223

7.2. Пептидное картирование — типы анализируемых структур 225

7.3. Картирование пептидов на практике....... 226

7.3.1. Картирование по Кливленду......... 226

7.3.2. Двумерное картирование пептидов....... 231

7.3.3. Пептидное картирование с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии......... 235

7.4. Заключение.............. 240

Литература............... 241

Глава 8. Аналитические методы........... 243

8.1. Введение............... 243

8.2. Стекло................ 244

8.3. Вода................ 245

8.4. Соляная кислота............. 245

8.5. Концентрирование растворов белков........ 246

8.5.1. Методики.............. 248

8.6. Исчерпывающий гидролиз белков для аминокислотного анализа 249 8.6.1. Методики кислотного гидролиза ........ 250

8.7. Триптофан............... 252

8.7.1. Определение триптофана после щелочного гидролиза белка 252

8.7.2. Определение триптофана после кислотного гидролиза белка 253

8.7.3. Определение триптофана в интактном белке .... 254

8.8. Остатки амидов дикарбоновых аминокислот..... 255

8.8.1. Методики определения амидов........ 255

8.9. Серусодержащие аминокислоты......... 257

8.9.1. Методы определения........... 257

8Л0. Аргинин............... 260

616 ОГЛАВЛЕНИЕ

8.10.1. Методы определения.......... 260

8.11. Фосфорилированные аминокислоты........ 261

8.11.1. Гидролиз белка............ 261

8.11.2. Методы анализа............ 262

8.12. у-Карбоксиглутаминовая кислота........ 264

8.12.1. Гидролиз белка............ 264

8.12.2. Методы анализа............ 265

8.13. Ацетильная и формильная группы........ 266

8.13.1. Определение ацетильных и формильных групп . . . 267

8.14. Обнаружение соединений при хроматографии на бумаге и в тонком слое сорбента........... 268

8.14.1. Флуоресцентные методы обнаружения...... 268

8.14.2. Обнаружение с помощью нингидрина...... 268

8.14.3. Смешанные методы обнаружения....... 269

8.15. Тонкослойная хроматография аминокислот...... 271

8.15.1. Методы разделения........... 271

8.16. Колоночная хроматография аминокислот...... 272

8.16.1. Колонки и буферы........... 272

8.16.2. Внутренние стандарты.......... 275

8.16.3. Определение аминокислот......... 275

8.17. Газожидкостная хроматография аминокислот..... 285

8.17.1. Общая методика приготовления образцов..... 288

8.18. Количественное определение белка........ 290

8.18.1. Введение.............. 290

8.18.2. Определение белка с помощью реактива Фолина — Чикольте .............. 293

8.18.3. Определение белка с помощью биуретовой реакции . . 296

8.18.4. Определение белка с помощью кумасси бриллиантового голубого .............. 297

8.18.5. Определение белка с помощью сульфобромофталеина 298

8.18.6. Определение белка с тринитробензолсульфокислотой в присутствии липидов........... 299

8.18.7. Метод атомно-абсорбционной спектрофотометрии . . . 299

8.18.8. Спектрофотометрические методы....... 300

8.19. Методы окрашивания белков в гелях....... 302

8.19.1. Методы окрашивания белков красителями..... 304

8.19.2. Окрашивание белков комплексами серебра .... 305

8.20. Окрашивание белков на нитроцеллюлозной бумаге . . . 311

8.20.1. Окрашивание амидочерным......... 311

8.20.2. Окрашивание с помощью индийских чернил . . . . ЗП

8.20.3. Обнаружение с помощью антител....... 312

8.20.4. Обнаружение с помощью комплекса серебра и антител 312

8.21. Определение белка, присоединенного к твердому носителю 313

8.21.1. Белок, связанный с матрицей........ 314

8.21.2. Белок, связанный с сефарозой........ 314

8.21.3. Определение аминогрупп на твердом носителе . . . 315

8.21.4. Определение аминогрупп на гидрофильных матрицах . . 315

8.21.5. Определение аминогрупп реакцией с хлоранилом . . . 316

8.21.6. Определение природы заместителя на смоле по окрашиванию ............... 316

8.21.7. Колориметрическое определение карбодиимидов . . . 316

8.21.8. Флуорометрическое определение карбодиимида . . . 317

8.22. Углеводсодержащие белки.......... 317

8.22.1. Введение.............. 317

8.22.2. Метилгликозид-триметилсилильный метод..... 318

8.22.3. Определение уроновых кислот, гексозаминов и галактозы гликозаминогликанов метилгликозид-триметилсилильным

ОГЛАВЛЕНИЕ 617

методом.............. 320

8.22.4. Чувствительный метилгликозид-триметилсилильный метод 320

8.22.5. Метод газовой хроматографии — масс-спектрометрии 321

8.22.6. Определение нейтральных Сахаров и аминосахаров в виде альдитацетатов методом ГЖХ........ 321

8.22.7. Определение альдитов тонкослойной и газожидкостной хроматографией............ 321

8.22.8. Определение глюкозамина, галактозамина, триптофана и лизиноаланина на аминокислотном анализаторе . . • 322

8.22.9. Определение нейтральных Сахаров и аминосахаров на аминокислотном анализаторе......... 323

8.23. Благодарности............. 323

Литература............... 323

Глава 9. Энантиомерный анализ смеси аминокислот методом высокоэффективной жидкостной хроматографии...... 334

9.1. Введение............... 334

9.2. Реагенты............... 335

9.2.1. Синтез М,г\Г-ди-н-пропил-Ь-аланина....... 335

9.2.2. Растворы для ВЭЖХ........... 335

9.3. ВЭЖХ................ 336

9.3.1. Разделение на группы.......... 337

9.3.2. Энантиомерный анализ.......... 338

9.4. Заключение.............. 340

Литература............... 341

Глава 10. Традиционная стратегия определения структуры белков 342

10.1. Введение............... 342

10.2. Выбор стратегии исследования......... 344

10.3. Ферментативный гидролиз.......... 349

10.4. Фракционирование растворимых пептидов...... 351

10.4.1. Гель-фильтрация............ 353

10.4.2. Хроматография на колонке с дауэксом-50 ..... 355

10.4.3. Хроматография на колонке с ДЭАЭ-целлюлозой . . . 356

10.4.4. Высоковольтный электрофорез и хроматография на бумаге 356

10.5. Фракционирование нерастворимых пептидов..... 357

10.6. Контроль гомогенности и определение аминокислотной последовательности пептидов........... 357

10.7. Реконструкция полипептидной цепи........ 359

10.8. Методики............... 360

10.8.1. Аналитические электрофорез и хроматография на бумаге 360

10.8.2. Препаративные электрофорез и хроматография на бумаге 361

10.8.3. Окрашивание пептидов.......... 363

10.8.4. Элюирование пептидов.......... 363

Литература............. . . 364

Глава 11. Определение аминокислотной последовательности пептидов по

методу Эдмана с идентификацией даисиламинокислот 366

11.1. Введение............... 366

11.2. Дансилирование............. 366

11,2.1. Методика дансилирования......... 369

11.3. Конденсация и расщепление по Эдману...... 370

11.3.1. Деградация по Эдману. Методика....... 372

Литература............. . 373

618 ОГЛАВЛЕНИЕ

Глава 12. Методы твердофазного анализа аминокислотной последовательности .............. 374

12.1. Введение............... 374

12.2. Материалы.............. 375

12.2.1. Растворители............. 375

12.2.2. Реагенты.............. 377

12.2.3. Стеклянные шарики для разбавления навески полимеров 377

12.2.4. Носители.............. 377

12.2.5. Буферы для присоединения......... 378

12.2.6. Растворы реагентов и буферов для секвенатора . . . 378

12.3. Синтез смол.............. 379

12.3.1. Смолы на основе полистирола......' 379

12.3.2. Носители на основе стекла......... 382

12.3.3. Определение содержания аминогрупп в носителях на основе органических полимеров или пористых стекол . . 385

12.4. Методы присоединения ........... 386

12.4.1. Присоединение лизилсодержащих пептидов с помощью ДИТЦ.............. 386

12.4.2. ДИТЦ-метод с использованием изотиоцианатного стекла 389

12.4.3. Присоединение по лактону гомосерина...... 390

12.4.4. Присоединение по карбоксилу при помощи карбодиимида 391

12.4.5. Контроль степени присоединения....... 392

12.5. Отщепление на твердофазном секвенаторе...... 393

12.5.1. Колонка.............. 393

12.5.2. Упаковка колонки........... 394

12.5.3. Программа работы секвенатора....... 394

12.5.4. Рекация карбамоилирования........ 394

12.5.5. Растворители............ 395

12.5.6. Отщепление анилинотиазолинона....... 395

12.5.7. Перегруппировка анилинотиазолинона в ФТГ .... 395

12.6. Обсуждение.............. 399

12.6.1. Твердофазный анализ небольших пептидов .... 399

12.6.2. Твердофазный анализ крупных пептидов и белков . 400

12.6.3. Сравнение жидкофазного и твердофазного методов . . 401

12.6.4. Анализ структуры на микроуровне....... 401

Литература............... 403

Глава 13. Анализ фенилтиогидантоинов аминокислот..... 405

13.1. Введение............... 405

13.2. Аналитические методы........... 406

13.2.1. Высокоэффективная жидкостная хроматография . . . 406

13.2.2. Газожидкостная хроматография....... 417

13.2.3. Тонкослойная хроматография........ 417

13.2.4. Обратный гидролиз ФТГ-производных аминокислот . . 418 Литература............... 418

Глава 14. Определение аминокислотной последовательности пептидов с использованием 4-диметиламиноазобензол-4'-изотиоцианата (в

ручном варианте)............ 419

14.1. Введение............... 419

14.2. Реагенты и растворители.......... 419

14.3. ДАБИТЦ — ФИТЦ-методика в жидкофазном варианте . . 420

14.4. ДАБИТЦ — ФИТЦ-методика в твердофазном варианте . 420

14.5. Превращение тиазолинонов аминокислот в тио;идантоины 421

14.6. Идентификация ДАБТГ-аминокислот....... 421

14.6.1. Тонкослойная хроматография........ 421

ОГЛАВЛЕНИЕ 619

14.6.2. Высокоэффективная жидкостная хроматография . . . 423 14.7. Заключение.............. 423

Литература............... 424

Глава 15. Современное состояние автоматического жидкофазного анализа аминокислотной последовательности...... 425

15.1. Введение............... 425

15.2. Подготовка образца............ 425

15.3. Сравнение квадрола с летучими буферами..... 428

15.4. Полибрен............... 430

15.5. Реагенты и растворители.......... 430

15.6. Основные проблемы, возникающие при использовании автоматического секвенатора........... 432

15.6.1. Вакуумная система........... 432

15 6.2. Утечки в вакуумной линии в системе с одним насосом 433

15.6.3. Программирующее устройство........ 433

15.6.4. Реле............... 433

15.6.5

страница 96
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97

Скачать книгу "Практическая химия белка" (19.5Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
оптом купить ручки на розетке для межкомнатных дверей в москве
http://www.prokatmedia.ru/notebook.html
анализ на триглицериды подготовка
домашний кинотеатр студия

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(17.08.2017)