нфигурацию гликозидных связей. Более того, по спектру можно измерить относительное содержание различных типов остатков в цепи.

Еще более интересно то, что химический сдвиг определенных ядер 13С в моносахаридных остатках зависит не только от структуры самого остатка, но и от структуры других звеньев, связанных с ним гликозидной связью. Так, остатки Б и Г (см. с. 99), взятые изолированно, представляются химически эквивалентными. Однако первый из них гликозилирован в положении 3 остатков 3,6-ангидро-L-галактозы (А), а второй – остатков 2-О-метил-3,6-ангидро-L-галактозы (В). В связи с этим химические сдвиги ядер С-3 остатков Б и Г оказываются различными (82,2 и 82,7 м.д. соответственно). Такая чувствительность положения сигналов в спектре 13С ЯМР к окружению моносахаридного звена открывает захватывающие возможности для определения последовательности остатков в цепи.

Таким образом, спектроскопия ЯМР на ядрах 13С позволяет не только определять природу, тип связи, конфигурацию гликозидных остатков, входящих в состав биополимера, т.е. решать задачу мономерного анализа, но и устанавливать ближний порядок в расположении этих остатков в цепи, т.е. получать информацию, извлекаемую обычно из методов фрагментации. Принципиально важно, что такой анализ является неразрушающим. Поэтому весь полисахарид, использованный для съемки спектра, возвращается к исследователю в неизменном виде. В свете сказанного можно полагать, что в ближайшем будущем этот метод исследования станет одним из ведущих для изучения полисахаридных структур и заставит классические

Деструктивные методы значительно уступить свои позиции.

Мы рассмотрели несколько методов структурного анализа полисахаридов. Они далеко не исчерпывают всего арсенала инструментов исследования в этой области, но характеризуют многие важные принципы такого исследования. В смысле возможностей выяснения ближнего порядка моносахаридных звеньев в цепях и их дальнего порядка, а также оценки общего плана построения макромолекулы эти методы информативны далеко не в равной степени. Если, как мы видела, для характеристики ближнего порядка эти методы вполне пригодны, то с вопросами дальнего порядка дело обстоит гораздо менее благополучно. В сущности, все эти методы (заметим еще раз, основные методы структурного анализа полисахаридов) позволяют узнать о дальнем порядке очень мало, по крайней мере в общем случае. Это, однако, не эквивалентно бессилию современной науки перед проблемой установления структуры сложных полисахаридов. Есть несколько эффективных подходов к определению общей схемы построения цепей и дальнего порядка звеньев, хотя и носящих более частный характер, чем разобранные выше методы. Вот один из примеров.

В разветвленных полисахаридах довольно частый случай – расположение более лабильных к кислотному гидролизу звеньев в боковых цепях и более прочных – в главной цепи. Тогда при частичном гидролизе можно получить набор моносахаридов и низших олигосахаридов из боковых цепей и полимерный материал главной цепи. Такой результат позволяет сразу установить, каково в общих чертах распределение определенных типов остатков между главной и боковыми цепями, а также, что не менее важно, получить достаточные количества полисахарида упрощенной структуры (такие полимерные фрагменты часто называют деградированными полисахаридами) и установить его строение, т.е. решить уже более простую задачу, чем установление строения нативного (неизмененного) полисахарида.

Итак, мы видим уже два принципа установления структуры сложных полисахаридов: с одной стороны, путь от мономерного анализа, через расщепление на олигосахаридные блоки и реконструкцию последовательности моносахаридных остатков во все более длинных сегментах цепей, а с другой – путь от общего представления

о макромолекуле, как о целом, через последовательную локализацию целых групп или типов моносахаридных остатков в определенных крупных элементах структуры (в главной цепи, в боковых цепях, в узлах и т.д.) и до локализации отдельных моносахаридов в определенных положениях этих цепей. Есть еще и третий путь, в некоторых случаях дающий весьма обширную информацию о структуре. Он связан с применением ферментов, которые катализируют расщепление полисахаридных цепей.

Главная особенность ферментов, как инструментов структурного анализа полисахаридов – высокая, в некоторых случаях абсолютная, спекифичность их действия. Ферменты, расщепляющие полисахариды (полисахаридазы), как правило абсолютно специфичны к конфигурации гликозидной связи (например, фермент настроенный на гидролиз ?-гликозидной связи, совершенно не действует на ?-гликозидные связи), абсолютно специфичны к размеру цикла моносахаридного остатка и высоко спекифичных к структуре и конфигурации самого моносахаридного звена. Кроме того, и это особенно важно для установления строения полисахаридов, полисахаридазы обычно высоко избирательны к типу связей и к структуре остатков в ближайшем окружении к расщепляемой гликозидной связи. Поэтому уже сам факт расщепления опред