химический каталог




Биологическая химия

Автор Т.Т.Березов, Б.Ф.Коровкин

стаются физико-химические методы (гравиметрические, осмометрические, вискозиметрические, электрофоретические, оптические и др.). На практике наиболее часто используются методы седиментационного анализа, гель-хроматография и гель-электрофорез. Определение молекулярной массы белков методами седиментационного анализа проводят в ультрацентрифугах*, в которых удается создать центробежные ускорения

* Впервые ультрацентрифуга была сконструирована шведским ученым Т. Сведбергом. Прибор был снабжен оптической приставкой, способнойпериодическичерез равные промежутки времени фотографировать процесс осаждения (седиментации) белковых частиц.

^jfcJr* JL X IB'V' i УМ 111 itiiiliinlCi* ДЛ»^ I I LF 1^»' JLr -Jmi \r \J \s W ЖХ \»» V.«r Ь^СЛи-г у \r* M\J**J Ж JLx X^r" sJ^lVJLJLAKyJL JL JL L/ЖХ JL JPXJTпЛв* Ж X Ж XVI <

^ihssV / ils ' ль *F -A jy

Обычно вычисляют молекулярную массу по скорости седиментации молекул белка или седиментационному равновесию. По мере перемещения молекул от центра к периферии образуется резкая граница растворитель-белок (ретттстрттруетс я автомятп1 icckh). Оптические свойства растворителя и белка используются iipii oiг|куделении скорости седимент;ниш; последнюю выражают че|>ез константу седиментации s, которая зависит как от массы» гак и от формы белковоП частицы:

1де г скорость перемещения границы растворитель белок, см/с; «о учло вая скорость ротора, рад/с;/- расстояние от центра ротора до середины ячеМки с раствором белка, см. Константа седиментации имеет размерность времени (ее выражают в секундах). Величина константы седиментации, равная 1 • 1СГП с, условно принята за единицу и названа сведбергом (S). Значения констант седиментации большинства белков лежат в пределах 1 50 S, хотя в ряде случаев эти значения щкчщщаюх 100 S.

Для вычисления молекулярном массы (М), помимо константы еедпмеп тации, необходимы дополнительные сведения о плотности раствори к i i и белка и другие согласно уравнению Сведберга:

М

Я

где R - газовая постоянная, прг/(моль-град); / абсолютная температура (по шкале Кельвина); 5-константа седиментации; р плотность раствори теля; v — парциальный удельный объем молекулы белка; D - коэффициент диффузии.

Определение молекулярной массы белков методом ультр аце нтри фут и-рования тттебует много времени и сложном и доро] oci оя1цеи аппаратуры. Полому в последние годы разработаны два более простых метода fiejib хроматография п электрофорез). При использовании гель хроматографии в первую очередь требуется откалиброватъ колонку. Для уми через колонку с сефадексом пропускают несколько белков с известными молекулярными массами и строят график, откладывая значения логарифмов

IVtOJICKyJT?ГрТТО"Й" тУГЛОСТ>Т TTJ^OTTl Ht НК 3JT^0X|^HOBUHLJbDC О^ЯЕэОМОВ| KOTOplJC ВСЗХОДЯТ| ЖЖК

показяпо па рпс. 1.9.

Известно, что меж,.1!,}' логарифмом молекулярной массы бедка, имеющего сферическую форму, и элюционным объемом существует прямая зависимость. Поэтому легко определить молекулярную массу исследуемого белка, зная его объем элюции. Второй разновидностью этого метода является тонкослойная гель-хроматография. Длина пробега белка (в миллиметрах)

Рис, 1.9. Измсрешю иуьема элюции (%).

Рис. 1.10. Зависимость между длиной пробега белковых частиц при гель-хроматографии в тонком слое сефадекса ]' l.so (иержтонкого) и их молекулярными массами (в полулогарифмической системе координат).

1 - рибонуклеаза; 2 - химотрипсиноген; 3 -яичный альбумин; 4 - сывороточный альбумин; 5- ^-глобулин; Х-белок с неизвестной молекулярной массой.

через тонкий слой сефадекса находится в логарифмиче ской зависимости от молекулярной массы белка (рис. 1.10).

Гель-хроматография, кроме простоты и быстроты, имеет дополнительное преимущество: не требуется выделять белок в чистом виде, так как примеси других белков по мешают определению, поскольку каждый из них проходит через колонку со свойственной ему скоростью, определяемой молекулярной массой. Это обстоятельство широко используется в энзимологии, когда оказывается возможным определение молекулярной массы даже очень небольшого количества фермента в присутствии других белков, не обладающих аналогичной каталитической активностью.

При использовании диск электрофонам в полпакрплампдном геле для oiнаделения молекулярном массы белков также строят график зав] 1СИМОСТИ между логарифмом молекулярной массы калибровочных белков н нодвпж костью белковых частиц в пош1акр1шамидном геле, а затем, определив подвижность исследуемого белка, по графику находят его массу (рис. 1.11). Электрофорез проводят в присутствии детергента додецилсульфата натрия, так как только в этом случае наблюдается прямая пропорциональная зависимость меж,!|,у молекулярной массой п подвижностью белков. Ьелки с четвертичной структурой при них условиях распадаются па еуб^дишщы, поэтому метод находит широкое применение для оп|>еделеппя молекуляр ной массы субъединиц белка.

Рве 1.1L Зависимость между молекулярной массой и относительной подвижностью белка при диск-

страница 21
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258 259 260 261 262 263 264 265 266 267 268 269 270 271 272 273 274 275 276 277 278 279 280 281 282 283 284 285 286 287 288 289 290 291 292 293 294 295 296 297 298 299 300 301 302 303 304 305 306 307 308 309 310 311 312 313 314 315 316 317 318 319 320 321 322 323 324 325 326 327 328 329 330 331 332

Скачать книгу "Биологическая химия" (5.27Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
настенная плитка atrium alpha taupe 25x70
большой будильник купить
Гарант Консул 30012.L
шоу монахов шаолинь купить билет

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(05.12.2016)