химический каталог




Введение в биотехнологию

Автор М.Е.Бекер

овным компонентом которой является лактоза. Институтом микробиологии АН БССР и Институтом микробиологии им. А. Кирхенштейна АН ЛатвССР разработана технология получения препаратов целлюлолитических ферментов. Предварительно от молочной сыворотки отделяют белок.

В качестве продуцента может быть использован выделенный в Институте микробиологии АН БССР гриб Trichoderma lignorum ОМ534, позволяющий получить весь комплекс целлюлолитических ферментов (включая Ci, С2, Сх компоненты), необходимый для расщепления природных целлюлозусодержащих субстратов. Посевным материалом служит взвесь спор или 1—2-суточный мицелий, вносимый в среду в количестве 5% объема среды. Состав среды следующий: осветленная молочная сыворотка, разбавленная водопроводной водой в 3 раза, NaN03 — 0,3%, (NH4)2S04— 0,06%, MgS04-7H20 — 0,05%. Оптимальная температура культивирования 29°С.

198

199

Как следует из табл. 20, наиболее активно синтез целлюлазьг протекал при подаче одного объема воздуха на один объем среды (при частоте вращения мешалки 280 об/мин).

Продолжительность ферментации (время достижения максимальной активности целлюлаз в культуральной жидкости) составляет 60—62 ч.

Характерной особенностью синтеза целлюлазы Т. lignorum на среде с молочной сывороткой является активное накопление ферментов в культуральной жидкости в интервале 36—54 ч и довольно быстрое падение активности в последующие часы. Максимум накопления целлюлазы в культуральной жидкости совпадает по времени с максимальным потреблением лактозы среды и рН 7,6— 7,8. Активность фермента в это время достигает 3,0— 3,1 С2 ед./мл; концентрация биомассы 10—12 г/л, содержание белка 1,1 мг/мл и содержание редуцирующих Сахаров в культуральной жидкости 0,1 %.

Далее, в течение нескольких часов (в среднем 2—4) происходит повышение рН до 8,0—8,1 и резкое падение активности целлюлазы почти вдвое. Об окончании ферментации можно судить по рН среды 7,8, внешнему виду мицелия — плотный желтого цвета и прозрачной культуральной жидкости. Повышение рН до 8,0 и выше сопровождается началом автолиза мицелия и помутнения культуральной жидкости. Быстрое падение активности целлюлаз в культуральной жидкости через несколько часов после завершения ферментации происходит, по-видимому, из-за действия проте-олитических ферментов, образующихся за счет наличия сывороточного белка в среде.

Осаждение целлюлаз из культуральной жидкости можно осуществить ацетоном, изопропанолом и танином с желатином. При использовании ацетона, изопропанола и этанола необходимо добавить три объема осадителя на объем культуральной жидкости. ~ Исходный рН среды 7,6—7,8, температура Ю—15°С. Осадок отделяют через 20—30 мин после добавления осадителя.

200

Высаливание сульфатом аммония необходимо вести при 80% насыщении, исходном рН среды 7,8 и температуре 10—15°С. Длительность формирования осадков 24 ч. Отделяют осадок центрифугированием при 3000—4000 об/мин в течение 10—15 мин. Ферментный осадок лиофильно или под вакуумом сушат при 25—30°С з,о остаточной влажности 10—12%.

Таблица 21 Эффективность осаждения целлюлаз, полученных на среде с молочной сывороткой, различными осадителями

Осаднтель Количество препарата, г в 1 л культуральной жидкости Содержание белка в препарате, % Активность препарата С,, ед./г Выход по активности, %

Ацетон

Изопропанол

Этанол

Сульфат аммония Танин с желатином

Примечание. Выхо 1,5

1,8—2,3 0,9

3,0—3,2 2,0

I по активно 33

35—41 38

12—25 80

.ти дан в пе] 70

140—150

60

580

750—600 есчете на бе; 10

17—20 8

90 50

ок.

Результаты выделения целлюлаз различными осадителями показаны в табл. 21. Из нее видно, что наиболее высокие показатели по активности и выходу дают препараты, осажденные сульфатом и танином. Оба способа осаждения имеют свои преимущества. Наиболее эффективно осаждение целлюлозы танином и желатином. Однако сульфатосажденный препарат обладает более высокой удельной активностью, лучшие образцы препарата имеют следующие показатели: Ci — 1000 ед./г, С2 — 800 ед./г и С, — 1500 ед./г (активность целлюлолитических ферментов дана в единицах по Mandels, Weber).

При осаждении целлюлаз вместе с биомассой из культуральной жидкости выход препарата возрастал в среднем в 10 раз, однако активность его снижалась.

201

Хорошие результаты дает использование сульфат-изопропило-вого способа выделения целлюлазы из культуральной жидкости. В качестве оптимальных условий выделения целлюлолитических ферментов можно считать следующие: температура 4—15°С, исходный рН культуральной жидкости 7—8, длительность высаливания сульфатом аммония 12—16 ч, концентрация изопропанола 10%. При этом выход фермента по активности достигает 75— 80%, а активность полученного ферментного препарата составляет Ci — 1000; С2 — 1130 и С* — 3900 ед./г. Лучшим методом сушки, обеспечивающим максимальную стабильность препарата является лиофильная или вакуумная сушка при относительно низкой температуре.533

Выделение и очистка ферментов I

Ферменты, растворенные в цитоплазме клеток, легко экстр

страница 70
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81

Скачать книгу "Введение в биотехнологию" (2.32Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
изгородь из деревянного штакетника брянск
kg49na71 цена
сантехника москва производитель
аренда форд мондео акпп для такси

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(03.12.2016)